15032352——因美纳Illumina NXTR XT 样本制备试剂盒用户指南

摘要：本文为科研人员提供因美纳Illumina NXTR XT 样本制备试剂盒（货号15032352）的详细用户指南。涵盖试剂盒基本信息、特性、作用机制、应用场景、操作流程、注意事项、性能参数及常见问题解答，助力科研人员高效开展实验。
关键词：因美纳；Illumina NXTR XT；样本制备试剂盒；用户指南

一、引言

在基因组学、转录组学等科研领域，高通量测序技术已成为研究生物分子信息的重要手段。而样本制备作为测序流程的关键环节，其质量直接影响测序结果的准确性和可靠性。因美纳Illumina NXTR XT 样本制备试剂盒（货号15032352）是一款专为Illumina测序平台设计的高效样本制备工具，能够为科研人员提供高质量的测序文库，助力科研工作的顺利开展。本文旨在为科研人员提供一份详细、专业的用户指南，帮助大家更好地了解和使用该试剂盒。

二、产品概述

（一）基本信息

• 品牌：因美纳（Illumina）

• 产品名称：Illumina NXTR XT 样本制备试剂盒

• 货号：15032352

• 适用平台：Illumina测序平台

• 存储条件：部分组分需冷冻运输（-25℃到 -15℃），部分组分需冷藏运输（2℃到 8℃），具体见产品说明书

• 有效期：12个月（在规定存储条件下）

（二）产品组成

该试剂盒包含多个组分，如文库稀释缓冲液、MiSeqTMDx试剂卡盒、MiSeqTMDx SBS溶液（PR2）、MiSeqTMDx流动槽等。每个组分都有其特定的功能和用途，共同协作完成样本的制备过程。

（三）产品特性

• 高通量：每个流动槽可批量处理多达192个样本，大大提高了实验效率。

• 灵活性：具有更高的样本通量和批处理选项的灵活性，可满足不同规模实验的需求。

• 整合性：将多种生物标志物检测整合到一项检测中，泛癌生物标志物内容与关键指南和临床试验相匹配。

三、作用机制

Illumina NXTR XT 样本制备试剂盒基于边合成边测序（SBS）的原理进行工作。在流动槽中捕获样本库，并使用SBS方法在仪器上进行测序。SBS采用可逆终止子方法，在单个碱基掺入模板并不断延伸DNA链时进行检测。具体而言，试剂盒中的各种组分协同作用，完成样本的片段化、末端修复、加A尾、接头连接、文库扩增等步骤，最终生成适合测序的文库。

四、应用场景

（一）基因组学研究

可用于全基因组测序、目标区域捕获测序等，帮助科研人员深入了解生物体的基因组结构和变异情况。

（二）转录组学研究

适用于转录组测序（RNA-Seq），能够准确测定基因的表达水平，为研究基因调控机制提供重要信息。

（三）癌症研究

在癌症基因组研究中，该试剂盒可用于检测癌症相关的基因突变、融合基因等，为癌症的诊断、治疗和预后评估提供依据。

（四）单细胞测序

支持单细胞基因组测序和转录组测序，为研究细胞异质性提供了有力工具。

五、操作流程

（一）样本准备

1. 提取DNA/RNA：根据样本类型（如血液、组织、细胞等），选择合适的方法提取DNA或RNA。

2. 质量检测：使用Qubit、Picogreen或其他染料法对DNA/RNA浓度进行准确定量，并使用Agilent Bioanalyzer 2100等设备检测样本的长度分布和质量。

（二）文库制备

1. 片段化：将提取的DNA/RNA进行片段化处理，可根据样本类型和实验需求选择合适的片段化方法。

2. 末端修复和加A尾：使用试剂盒中的相应组分对片段化的DNA/RNA进行末端修复和加A尾处理，使其适合后续的接头连接。

3. 接头连接：将特定的接头连接到DNA/RNA片段的两端，接头中含有测序所需的引物结合位点和索引序列。

4. 文库扩增：使用高保真DNA聚合酶对连接好接头的文库进行扩增，增加文库的浓度和产量。

（三）文库质检

1. 浓度检测：使用qPCR方法进行文库浓度检测，排除单端或双端都不连接Adapter的不可测序文库的干扰。

2. 长度分布检测：通过Agilent Bioanalyzer 2100等设备检测文库的长度分布，确保文库质量符合要求。

（四）上机测序

将质检合格的文库按照Illumina测序仪的操作要求进行上机测序。

六、注意事项

（一）试剂处理与储存

1. 部分组分需冷冻运输和储存，在-25℃到-15℃环境中保持稳定直至有效期末。文库稀释缓冲液和MiSeqTMDx试剂卡盒为一次性使用的试剂，为保持稳定，在有效日期前只允许解冻到室温1次。一旦解冻，必须装载样本库并立即在MiSeqTMDx仪器上运行。或者，解冻的试剂盒可在2℃到8℃的环境下最多保存6小时，然后装载样本库并立即在MiSeqTMDx仪器上运行。

2. 部分组分需冷藏运输和储存，在2℃到8℃环境中保持稳定直至有效期末。MiSeqTMDx SBS溶液（PR2）和MiSeqTMDx流动槽为一次性使用产品。

3. 试剂外观的变化可能表明材料的变质，应不使用试剂。

（二）操作环境

1. 提前开好空调，控制房间温度和湿度。温度和湿度极大地影响试剂效果和光路，温度高测序速度下降且质量不好，湿度大不仅会影响光路，还会使得flowcell上面凝结水滴，导致测序直接失败。

2. 搬运仪器的时候需要锁住零部件，要让工程师来做，否则机器可能出问题，影响光路。

（三）实验操作

1. 在操作过程中，应严格遵循试剂盒说明书的要求，避免交叉污染。

2. 使用无RNase和DNase的枪头、EP管进行试验，确保实验环境的洁净度。

3. 进行文库扩增前，应确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。

七、性能参数

八、常见问题解答

（一）文库产量低

可能原因：样本质量差、扩增循环数不足、试剂质量问题等。解决方法：优化样本提取方法，增加扩增循环数，更换高质量的试剂。

（二）测序质量差

可能原因：文库质量不佳、测序仪状态不良、环境因素等。解决方法：重新制备文库，检查测序仪的状态并进行维护，控制实验环境的温度和湿度。

（三）交叉污染

可能原因：操作不规范、实验器材未清洁干净等。解决方法：严格遵循操作规程，使用无污染的实验器材，对实验区域进行定期清理。

九、结论

因美纳Illumina NXTR XT 样本制备试剂盒（货号15032352）是一款功能强大、性能稳定的样本制备工具，为科研人员提供了高效、准确的样本制备解决方案。通过遵循本用户指南中的操作流程和注意事项，科研人员可以充分发挥该试剂盒的优势，提高实验效率和准确性。希望本指南能够帮助用户更好地了解和使用该试剂盒，为科研工作提供有力支持。