Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 用户指南

Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 用户指南

——精准靶向犬尿氨酸酶（KYNU）的高效科研工具

一、产品概述

Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 是赛默飞世尔科技（Thermo Fisher Scientific）旗下 Pierce 品牌研发的单克隆抗体，专为检测和定量犬尿氨酸酶（Kynureninase, KYNU）设计。该抗体通过重组人源 KYNU 抗原免疫新西兰白兔制备，经抗原亲和纯化，确保高特异性和低背景信号。

核心参数：

• 货号：PA542808

• 规格：100 μg（100 μL）

• 种属来源：Rabbit Monoclonal

• 宿主/亚型：Rabbit IgG

• 纯化类型：抗原亲和纯化

• 保存条件：短期（2-8℃），长期（-20℃），避免反复冻融

• 应用：免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）、ELISA

二、技术优势

1. 高特异性与灵敏度

• WB：1:1000-1:5000 稀释度下，可检测 45-50 kDa 人源 KYNU 蛋白。

• IHC：1:50-1:200 稀释度下，人肝组织细胞质呈强阳性染色。

• IF：0.5-2 μg/mL 浓度下，HeLa 细胞中 KYNU 定位清晰。

• 抗原设计：基于人源 KYNU 重组蛋白（覆盖氨基酸序列片段），与鼠源（高序列一致性）和大鼠源（高序列一致性）同源蛋白具有交叉反应性。

• 验证数据：

2. 稳定的质量控制

• 每批次抗体均通过 WB、IHC 和 ELISA 验证，确保批间一致性。

• 提供 RRID（如适用），支持实验结果的可重复性验证。

3. 灵活的应用场景

• WB：适用于检测内源性或过表达 KYNU 蛋白。

• IHC：适用于石蜡切片或冰冻切片，可结合 DAB 或荧光底物显色。

• IF：适用于活细胞或固定细胞，可与其他细胞器标记物共定位分析。

三、操作指南

（一）实验前准备

1. 试剂与耗材

• 抗体：Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL

• 封闭液：5% BSA 或 10% 脱脂奶粉（PBST 配制）

• 一抗稀释液：PBST + 0.1% Tween-20

• 二抗：根据实验选择 HRP 或荧光标记抗兔 IgG

2. 样本准备

• WB：细胞裂解液（含蛋白酶抑制剂）或组织匀浆液，蛋白浓度 1-5 μg/μL。

• IHC：石蜡切片脱蜡至水，或冰冻切片固定。

• IF：多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100 透化。

（二）实验操作

1. WB

• 电泳：8-12% SDS-PAGE，上样 20-50 μg 蛋白。

• 转膜：PVDF 膜，200 mA 恒流转膜 90 分钟。

• 封闭：5% BSA，室温孵育 1 小时。

• 一抗孵育：PA542808 抗体（1:2000 稀释），4℃ 过夜。

• 二抗孵育：HRP 标记抗兔 IgG（1:5000 稀释），室温 1 小时。

• 显色：ECL 底物，化学发光成像。

2. IHC

• 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）高压修复 10 分钟。

• 封闭：10% 羊血清，室温 30 分钟。

• 一抗孵育：PA542808 抗体（1:100 稀释），4℃ 过夜。

• 二抗孵育：HRP 标记抗兔 IgG（1:200 稀释），室温 30 分钟。

• 显色：DAB 底物，苏木精复染。

3. IF

• 封闭：10% 羊血清，室温 1 小时。

• 一抗孵育：PA542808 抗体（1 μg/mL），4℃ 过夜。

• 二抗孵育：Alexa Fluor 488 标记抗兔 IgG（1:500 稀释），室温 1 小时。

• 核染色：DAPI（1 μg/mL），室温 5 分钟。

（三）实验后分析

• WB：使用 ImageJ 或 AlphaView 软件定量条带灰度值。

• IHC：通过 ImageJ 或 Halo 软件分析阳性细胞比例。

• IF：使用共聚焦显微镜采集图像，分析共定位系数。

四、使用技巧与高效操作

1. 抗体稀释优化

• 建议从 1:1000 开始梯度稀释，根据实验结果调整。

• 避免重复冻融，分装后保存。

2. 内参选择

• WB：推荐使用 GAPDH 或 β-Actin 作为内参。

• IHC：可结合 DAPI 染色评估细胞核完整性。

3. 对照设置

• 阳性对照：已知表达 KYNU 的细胞系（如 HepG2、HeLa）。

• 阴性对照：省略一抗或使用同型对照抗体。

五、注意事项

1. 安全规范

• 抗体仅供科研使用，不可用于人体或动物实验。

• 操作时佩戴手套，避免直接接触。

2. 操作细节

• WB：转膜后需用丽春红染色确认转膜效率。

• IHC：抗原修复后需充分冷却至室温，避免非特异性结合。

• IF：透化时间需根据细胞类型优化，避免过度透化。

3. 故障排除

• 高背景：增加封闭时间或提高抗体稀释度。

• 无信号：检查一抗保存条件，或延长孵育时间。