DP117 Li-cor Revert™ 总蛋白染色试剂用户指南

DP117 Li-cor Revert™ 总蛋白染色试剂用户指南

——精准定量Western Blot总蛋白，提升实验可靠性的金标准工具

一、产品概述

DP117 Li-cor Revert™ 总蛋白染色试剂是一款基于膜（转膜后）的标准化策略，专为Western Blot实验设计。该试剂可对样品中的所有蛋白质进行染色，并通过Odyssey成像系统在700 nm通道中检测，实现总蛋白的线性定量分析。相比传统看家蛋白（如β-actin、GAPDH）归一化方法，Revert™试剂可避免生物学变异的影响，显著提高Western Blot定量分析的准确性和重复性。

二、核心参数与特性

产品优势：

1. 高线性范围：

• 在1-60 μg总蛋白范围内提供线性信号，优于看家蛋白（如β-actin在20 μg以上时信号饱和）。

• 示例：Jurkat细胞裂解液（10 μg/道）在4-12% Bis-Tris凝胶中分离后，Revert 700试剂在700 nm通道的信号强度与蛋白浓度呈强线性相关（R²＞0.99）。

2. 快速高效：

• 染色过程＜10分钟，显著缩短实验时间。

• 无需额外设备或特殊凝胶，可直接融入现有Western Blot流程。

3. 避免生物学变异：

• 总蛋白归一化不受细胞类型、生长条件或发育阶段的影响。

• 示例：小鼠不同组织（肌肉、心脏、脾脏）中β-actin表达差异显著（CV=36.6%），而Revert试剂归一化后数据一致性显著提高。

三、应用场景

1. Western Blot标准化

• 纠正上样量或转膜效率的差异，提高定量准确性。

• 示例：通过Revert试剂归一化后，不同样本的目标蛋白表达差异从原始数据的2.3倍降低至1.1倍。

2. 多组织/多细胞系比较

• 适用于跨组织或跨细胞系的蛋白表达分析，避免看家蛋白表达不稳定导致的偏差。

3. 药物筛选与机制研究

• 在高通量筛选中提供稳定的总蛋白归一化参考，确保实验结果的可靠性。

四、操作指南

（一）使用方法

1. 转膜后处理

• 将转膜后的PVDF或硝酸纤维素膜置于托盘中，用Q-water清洗3次，每次5分钟。

2. 染色

• 加入Revert 700染色液，室温孵育5-10分钟（根据膜类型调整时间）。

3. 清洗

• 用Revert清洗液清洗3次，每次5分钟，去除未结合的染色剂。

4. 逆转

• 加入Revert逆转液，室温孵育5分钟，终止染色反应。

5. 成像

• 使用Odyssey CLx成像系统在700 nm通道扫描膜，获取总蛋白信号。

（二）实验建议

（三）常见问题

1. Q：背景信号过高？
   A：检查清洗步骤是否充分，或缩短染色时间。

2. Q：信号强度不足？
   A：确认膜类型是否兼容，或延长染色时间至10分钟。

3. Q：不同批次试剂信号差异大？
   A：确保试剂储存条件（-20°C，避免反复冻融），并使用同一批次试剂进行实验。

五、技术对比与选型建议

选型建议：

• 高精度需求：优先选择Revert 700试剂（货号：926-11015），适用于700 nm通道成像。

• 多通道检测：可搭配Revert 520试剂（货号：926-11023）进行520 nm通道成像。

• 经济型选择：Revert Total Protein Stain Kit（货号：926-11007）包含全套试剂，适合中小规模实验。

六、维护与储存

1. 储存条件

• -20°C避光保存，避免反复冻融（建议分装后使用）。

• 有效期：自收到货起2年。

2. 废弃处理

• 废弃试剂需按照实验室化学品处理规定进行，建议收集在专用废液容器中。