多酶混合体系:该试剂盒包含多种经过优化配比的酶混合物,这些酶能够特异性地作用于肿瘤组织中的细胞外基质成分和细胞间连接蛋白。例如,其中的蛋白酶可水解细胞间的胶原蛋白和纤维连接蛋白,而核酸酶能降解组织中释放出的 DNA,防止细胞聚集,从而实现温和且高效的组织解离,减少对细胞的损伤,维持细胞的高活性和表面抗原表位完整性。
配套缓冲液系统:试剂盒中的缓冲液不仅为酶提供了适宜的反应环境,维持 pH 值和离子强度的稳定,还能在解离过程中保护细胞免受渗透压变化和氧化应激的影响。同时,缓冲液中的特殊成分有助于去除组织中的杂质,提高单细胞悬液的纯度,为后续实验提供更优质的样本。
广泛的肿瘤类型适用性:该试剂盒经过大量实验验证,适用于多种原发性肿瘤和异种移植物的解离,包括但不限于乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌等常见实体瘤,以及黑色素瘤等皮肤肿瘤。无论是新鲜获取的肿瘤组织样本,还是经过短期保存的样本,都能实现高效解离,满足不同肿瘤研究场景的需求。
高细胞产率与活力:通过优化的酶解配方和温和的解离条件,该试剂盒能够从肿瘤组织中获得数量可观的单细胞,显著提高肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的产率。同时,细胞活力得到有效保障,活细胞比例通常可达 80% 以上,为后续的细胞培养、流式细胞术分析、单细胞测序等实验提供充足且高质量的细胞来源。例如,在对乳腺癌组织的解离实验中,与传统手工解离方法相比,使用 Tumor Dissociation Kit 获得的单细胞数量增加了 30%,且细胞活力更高,为深入研究乳腺癌细胞的特性和功能提供了更丰富的样本资源。
出色的抗原表位保留:在肿瘤研究中,准确识别和分析细胞表面抗原对于鉴定细胞类型、研究细胞功能以及开发免疫治疗靶点至关重要。Miltenyi Tumor Dissociation Kit 在解离过程中能最大限度地保留细胞表面的抗原表位,确保后续基于抗体的检测和分析方法(如免疫荧光染色、流式细胞术分选等)的准确性和可靠性。这使得科研人员能够更精准地对肿瘤细胞和肿瘤微环境中的各类免疫细胞进行分型和功能研究,为揭示肿瘤发生发展机制和开发创新治疗方法提供有力支持。
操作简便与节省时间:试剂盒的操作流程经过精心设计,简单易懂,即使是经验相对较少的科研人员也能快速上手。与传统的手工解离方法(如剪刀剪碎组织后长时间酶解)相比,使用该试剂盒配合 gentleMACS Octo 等自动化组织解离设备,可将整个解离过程缩短至 2 - 3 小时,大大节省了实验时间和人力成本。同时,自动化设备的使用减少了人为操作差异,提高了实验结果的可重复性和稳定性,为大规模肿瘤样本处理提供了高效解决方案。
样本准备:新鲜获取的肿瘤组织应尽快置于预冷的保存液中,若不能立即进行解离,可在 4℃短暂保存,但需避免长时间放置导致组织自溶。对于冷冻保存的肿瘤组织,需在 37℃水浴中快速解冻后进行后续处理。
组织切割:将肿瘤组织转移至无菌培养皿中,用无菌手术刀或剪刀将其切成约 1 - 2mm³ 的小块,尽量保证组织块大小均匀,以促进酶解反应的一致性。
酶解反应:将切好的组织小块转移至 gentleMACS C 管中,加入适量的 Tumor Dissociation Kit 中的酶混合液,确保组织块浸没。旋紧管盖后,将 C 管放入 gentleMACS Octo 八通道组织解离器中,选择针对人肿瘤组织优化的内置程序(如 37C_h_TDK_3 等),启动解离程序。设备会通过机械振荡和酶解的协同作用,在设定的时间和温度条件下对组织进行高效解离。
细胞悬液制备:解离程序结束后,取出 C 管,将细胞悬液通过 70μm 的 MACS SmartStrainers 细胞滤网过滤至离心管中,以去除未解离的组织碎片和细胞团块。随后,对滤液进行离心,弃去上清液,用适量的缓冲液重悬细胞沉淀,即可得到单细胞悬液。
细胞分析与应用:获得的单细胞悬液可直接用于多种下游实验,如通过台盼蓝染色法或细胞计数仪检测细胞数量和活力;利用流式细胞术对肿瘤细胞和免疫细胞进行分型和功能分析;进行单细胞测序,深入探究肿瘤细胞的基因表达谱和分子特征;用于细胞培养,开展肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等功能实验;还可用于制备肿瘤类器官,模拟肿瘤的生长和发展过程,为肿瘤药物研发和个性化治疗提供更有效的模型。
肿瘤免疫研究:在一项关于肿瘤免疫逃逸机制的研究中,科研人员使用 Miltenyi Tumor Dissociation Kit 从肺癌患者的肿瘤组织中获得高纯度的肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞。通过流式细胞术分析,发现肿瘤微环境中存在大量免疫抑制细胞,且这些细胞表面的某些免疫检查点分子表达上调。进一步对这些细胞进行单细胞测序,揭示了肿瘤细胞与免疫细胞之间复杂的相互作用网络,为开发针对肺癌的免疫治疗新策略提供了重要理论依据。
肿瘤药物研发:某制药公司在开发新型抗肿瘤药物时,利用该试剂盒将人源肿瘤异种移植物(PDX)模型的肿瘤组织解离为单细胞悬液,然后将这些细胞接种到 96 孔板中进行药物敏感性测试。由于使用 Tumor Dissociation Kit 获得的细胞活性高且表型稳定,实验结果能够准确反映药物对肿瘤细胞的抑制效果,大大提高了药物筛选的效率和准确性,加速了新型抗肿瘤药物的研发进程。
肿瘤单细胞测序:在一项旨在绘制肿瘤单细胞图谱的大型研究项目中,研究团队使用 Miltenyi Tumor Dissociation Kit 对来自不同肿瘤类型和不同分期的大量肿瘤组织样本进行解离,成功获得了高质量的单细胞悬液。通过单细胞 RNA 测序技术,他们绘制了详细的肿瘤单细胞图谱,发现了一些新的肿瘤细胞亚群及其特异性标志物,为深入理解肿瘤的异质性和精准治疗提供了丰富的数据资源。