Invitrogen Qubit RNA IQ Assay Kit 实验操作是否符合规范

操作前准备

• 耗材与试剂检查：确认使用的枪头、离心管等耗材无 RNA 酶，若有疑虑，可通过查看产品说明或进行 RNA 酶检测试验来验证。同时，检查试剂盒内试剂是否齐全，有无过期、变色、沉淀等异常情况，确保试剂在有效期内且保存条件符合要求。

• 仪器设备检查：检查 Qubit 荧光计等仪器设备是否正常运行，可查看仪器的开机自检报告，确认光路系统、检测模块等提示。并且要确认仪器已按照规定的周期进行校准，校准记录完整，以保证仪器检测的准确性。

操作过程执行

• 样本处理环节

• 样本量准确性：查看吸取样本的体积是否准确，可通过检查移液器的设定值与实际吸取量是否一致来验证，如使用移液器校准器进行校准验证。对于 RNA 样本的稀释，要检查稀释倍数是否准确，计算过程是否正确。

• 操作手法规范性：观察在样本转移、混合等操作过程中，是否避免了剧烈振荡和过度吹打，以防 RNA 断裂。同时，要确认在加入试剂和样本时，是否按照说明书的要求缓慢加入，避免产生气泡。

• 避免污染措施：检查实验人员是否佩戴了干净的手套、口罩，实验台面和仪器是否经过 RNA 酶去除处理，操作过程中是否使用了无 RNA 酶的耗材，以防止外源 RNA 酶和杂质的污染。

• 试剂使用环节

• 试剂平衡与混匀：确认试剂从冰箱取出后是否平衡至室温，且在使用前是否轻轻混匀。可通过观察试剂瓶上的标签是否有未混匀的痕迹，或轻轻摇晃试剂瓶感受试剂的均匀程度来判断。

• 试剂添加准确性：检查试剂的添加量是否准确，移液器的使用是否正确，有无漏液、吸液不准确等情况。可以通过检查移液器的吸头是否安装紧密，以及在添加试剂后观察试剂液面的高度是否与设定值相符来判断。

操作后结果分析

• 结果重复性：对同一样本进行多次测量，查看结果是否具有良好的重复性。一般来说，多次测量的 RNA IQ 值和浓度的变异系数（CV）应在合理范围内，如 CV 值小于 10% 通常表示结果重复性较好。

• 对照结果：检查阳性对照和阴性对照的结果是否符合预期。阳性对照的 RNA IQ 值和浓度应与已知标准品的数值相近，阴性对照的检测结果应接近于零，否则说明实验存在问题，如试剂污染或操作失误。

• 与其他方法的一致性：将 Qubit RNA IQ Assay Kit 的检测结果与其他可靠的 RNA 定量或质量评估方法（如紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳等）的结果进行比较，若结果一致或相近，则说明实验操作可能是规范的；若结果差异较大，需仔细分析原因，可能是实验操作不规范，也可能是样本本身的问题或仪器故障。