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MTT 比色法
原理:活细胞中的线粒体脱氢酶能将 MTT(四唑盐)还原成不溶性的蓝紫色结晶甲臜,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。通过测定甲臜在特定波长下的吸光度,可反映细胞的活性和数量。
操作:将细胞接种到 96 孔板中,培养一段时间后加入 MTT 溶液,继续孵育。然后去除上清液,加入二甲基亚砜(DMSO)溶解甲臜,用酶标仪测定吸光度。
应用:常用于细胞增殖、细胞毒性和药物筛选等实验。
CCK - 8 法
原理:与 MTT 法类似,细胞内的脱氢酶可以将 CCK - 8 试剂中的 WST - 8 还原成水溶性的橙黄色甲臜。活细胞数量与甲臜生成量成正比,通过检测吸光度来衡量细胞活性。
操作:将细胞接种于培养板,加入 CCK - 8 溶液,孵育后直接用酶标仪测定吸光度。
应用:广泛应用于细胞活性检测、细胞增殖分析、药物筛选等领域。该方法操作简便,灵敏度高,且无需裂解细胞。
荧光染色法
原理:利用一些荧光染料对活细胞和死细胞进行特异性染色。例如,Calcein - AM 可被活细胞内的酯酶水解,产生绿色荧光,而死细胞由于酯酶活性丧失,不能产生荧光;碘化丙啶(PI)只能进入死细胞,与 DNA 结合后发出红色荧光。通过荧光显微镜或流式细胞仪可对细胞进行观察和分析。
操作:将细胞与荧光染料孵育,然后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
应用:可用于区分活细胞和死细胞,以及对细胞进行定量分析,常用于细胞凋亡、细胞周期等研究。
ATP 检测法
原理:ATP 是细胞内的能量货币,活细胞中含有大量 ATP,而死细胞中的 ATP 会迅速降解。通过检测细胞内 ATP 的含量,可反映细胞的活性。
操作:使用荧光素 - 荧光素酶试剂盒,该试剂盒中的荧光素在荧光素酶和 ATP 的作用下会发出荧光,荧光强度与 ATP 含量成正比。将细胞裂解后加入试剂盒试剂,用荧光检测仪测定荧光强度。
应用:常用于细胞活性检测、细胞增殖分析以及药物对细胞代谢的影响等研究。
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