营养物质:包含氨基酸、维生素、葡萄糖等细胞生长所必需的基础营养成分 。氨基酸是细胞合成蛋白质的原料;维生素参与细胞内众多的代谢反应;葡萄糖则为细胞提供能量,这些物质共同满足细胞生长、分裂和代谢的需求。
生长因子:如表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等 。这些生长因子能够与细胞表面的特异性受体结合,激活细胞内的信号传导通路,促进细胞的增殖、分化和存活。例如,EGF 可刺激上皮细胞的生长和分化,在皮肤细胞培养等实验中发挥重要作用。
结合蛋白:像转铁蛋白可结合并转运铁离子,为细胞提供铁元素,同时防止铁离子在溶液中产生自由基对细胞造成损伤;白蛋白能够结合和运输脂肪酸、激素等物质,维持细胞外环境的稳定 。
缓冲物质与 pH 调节剂:血清中的碳酸氢盐、蛋白质等成分构成缓冲体系,可维持细胞培养液的 pH 稳定在 7.2 - 7.4 的适宜范围,为细胞创造稳定的酸碱环境 。
高品质来源:血清取自澳大利亚特定区域的健康胎牛,该地区具有严格的动物健康监管体系,有效避免了疯牛病(BSE)、口蹄疫等重大传染病源的污染,从源头上保证了血清的安全性和高品质 。
严格的质量控制:
微生物检测:每一批次血清均经过严格的细菌、真菌、支原体和病毒检测 。采用灵敏度高的检测方法,如培养法、PCR 法等,确保血清无微生物污染,避免微生物对细胞培养造成干扰,甚至导致细胞死亡。
内毒素检测:通过鲎试剂法(LAL 法)精确测定血清中的内毒素含量,每批血清内毒素水平低于 0.06 EU/mL,远低于行业标准,减少内毒素对细胞生长和实验结果的不良影响 。
细胞培养性能测试:使用多种不同类型的细胞系(如 HeLa 细胞、CHO 细胞等)对血清进行培养性能测试,评估细胞的生长速率、形态、存活率等指标,确保血清能够为细胞提供良好的生长支持 。
稳定的批次间一致性:Thermo Fisher Scientific 采用标准化的生产流程和先进的质量控制体系,从血清采集、加工处理到最终检测,每一个环节都严格把控 。通过对关键指标的严格监测和调控,保证不同批次的血清在成分和性能上具有高度一致性,科研人员在进行长期实验或重复性实验时,无需担心因血清批次差异导致实验结果不稳定的问题。
广泛的适用性:适用于多种细胞类型的培养,无论是常规的细胞系,还是培养难度较高的原代细胞、胚胎干细胞等,都能提供良好的营养支持 。并且可与多种基础培养基(如 DMEM、RPMI 1640 等)配合使用,满足不同科研实验的需求。
便捷的使用方式:产品以 500 mL 瓶装形式提供,包装规格符合实验室常规使用需求。血清经过 γ 射线辐照处理,在不影响血清成分和性能的前提下,有效杀灭潜在的微生物,用户无需进行额外的灭菌处理,可直接按照实验需求进行稀释和使用,操作便捷高效 。
血清检查:收到血清后,立即检查包装是否完好,标签信息是否清晰准确,包括产品名称、货号、规格、批号、有效期、储存条件等 。将血清短暂离心(低速,如 1000 - 2000 rpm,离心 3 - 5 分钟),使附着在瓶盖上的血清集中于瓶底,避免损失。同时,观察血清外观,正常情况下应为浅黄色或琥珀色、澄清且无沉淀或浑浊现象。若发现血清颜色异常、有明显沉淀或异味,请勿使用,并及时联系供应商处理。
培养基配制:根据所培养细胞的类型和实验需求,选择合适的基础培养基 。在无菌环境下(如超净工作台),按照培养基说明书的要求,将基础培养基粉末溶解于适量的超纯水中,充分搅拌至溶解。然后,根据实验设计,添加相应的添加剂(如谷氨酰胺、丙酮酸钠等)。最后,按照一定比例(通常为 5% - 20%,具体比例需根据细胞类型和实验要求确定)加入胎牛血清,用无菌的移液管或注射器将血清缓慢加入培养基中,轻轻摇匀,使血清与培养基充分混合 。配制好的培养基应尽快使用,如需保存,可置于 2 - 8℃冰箱中,但保存时间不宜过长,以免影响培养基的营养成分和性能。
细胞培养耗材准备:准备好无菌的细胞培养瓶、培养皿、移液管、枪头、离心管等耗材 。确保所有耗材均经过严格的灭菌处理,可通过高压蒸汽灭菌或购买预灭菌的一次性耗材。在使用前,检查耗材的包装是否完好,避免污染。
细胞复苏(若为冻存细胞):从液氮罐中取出冻存的细胞,迅速放入 37℃水浴锅中,轻轻摇晃,使细胞在 1 - 2 分钟内快速解冻 。将解冻后的细胞悬液转移至无菌离心管中,加入适量的含血清培养基,轻轻吹打混匀,然后以低速离心(如 800 - 1000 rpm,离心 3 - 5 分钟),弃去上清液,去除冻存保护剂。向离心管中加入适量的新鲜配制的含血清培养基,轻轻吹打,使细胞均匀分散,制成细胞悬液。将细胞悬液接种到细胞培养瓶或培养皿中,补充适量的培养基,使细胞密度达到合适范围(根据细胞类型而定),然后将细胞培养瓶或培养皿放入细胞培养箱中,在适宜的温度(一般为 37℃)、湿度(95%)和气体环境(5% CO₂)下培养 。
细胞传代:当细胞生长达到 80% - 90% 汇合度时,需要进行传代培养 。首先,弃去细胞培养瓶中的旧培养基,用无菌的 PBS 缓冲液轻轻冲洗细胞 1 - 2 次,去除残留的培养基和代谢产物。然后,加入适量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液(根据培养瓶大小而定),轻轻摇晃培养瓶,使消化液均匀覆盖细胞表面,在 37℃培养箱中孵育 1 - 3 分钟,观察细胞形态变化,当细胞变圆、部分细胞开始脱落时,立即加入含血清培养基终止消化(血清中的蛋白可中和胰蛋白酶活性) 。用无菌的移液管轻轻吹打细胞,使细胞脱离培养瓶壁,形成细胞悬液。将细胞悬液转移至无菌离心管中,以低速离心(如 800 - 1000 rpm,离心 3 - 5 分钟),弃去上清液。根据实验需求,将细胞重新接种到新的培养瓶或培养皿中,补充适量的含血清培养基,放入细胞培养箱中继续培养 。
细胞冻存:当细胞生长状态良好且数量足够时,可进行细胞冻存,以备后续实验使用 。首先,将细胞按照上述传代步骤消化并制成细胞悬液,然后以低速离心(如 800 - 1000 rpm,离心 3 - 5 分钟),弃去上清液。向细胞沉淀中加入适量的细胞冻存液(通常为含 10% DMSO、90% 胎牛血清的培养基),轻轻吹打,使细胞均匀分散于冻存液中 。将细胞悬液分装到无菌的冻存管中,每管体积一般为 1 - 2 mL,并做好标记(注明细胞名称、冻存日期、批号等信息) 。将冻存管放入程序降温盒中,置于 - 80℃冰箱中过夜,然后转移至液氮罐中长期保存 。
血清保存:未开封的血清应储存于 - 20℃冰箱中,可保存 5 年 。避免反复冻融,因为冻融过程会破坏血清中的蛋白结构,影响血清性能。若血清需多次使用,可在开封后将其分装成小份(根据每次使用量确定分装体积),密封好后放入 - 20℃冰箱冷冻保存,每次使用时取出一份,避免整瓶血清多次冻融 。已开封的血清,若短时间内使用(1 - 2 周),可储存于 2 - 8℃冰箱;若长时间不用,仍需分装后冷冻保存 。
废弃物处理:实验过程中产生的废弃血清、培养基以及含有细胞的液体等,应按照实验室生物安全和化学废弃物处理规定进行分类处理 。对于含有生物活性物质的废弃物,需进行高压灭菌或化学消毒处理后,再进行丢弃,防止污染环境和传播生物危害 。
血清储存与解冻:
严格按照规定的温度储存血清,避免因储存温度不当导致血清变质。从 - 20℃冰箱中取出血清进行解冻时,应将血清置于 2 - 8℃冰箱中缓慢解冻,或采用水浴解冻的方式,但水浴温度不得超过 37℃,且解冻过程中需不断轻轻摇晃血清瓶,使血清均匀解冻 。避免将血清暴露在高温环境下快速解冻,以免引起血清中蛋白沉淀和活性降低。
解冻后的血清应尽快使用,若不能立即使用,应储存于 2 - 8℃冰箱中,并在一周内用完。若血清出现浑浊或沉淀,可通过低速离心(如 1000 - 2000 rpm,离心 5 - 10 分钟)去除沉淀后使用,但需注意沉淀可能会影响血清的部分性能 。
细胞培养操作:
在细胞培养过程中,要严格遵守无菌操作规范,在超净工作台中进行所有操作,使用前需对超净工作台进行紫外消毒和风机预吹处理 。操作时应佩戴口罩、手套,避免交叉污染。每次使用完移液管、枪头等耗材后,应及时丢弃,不得重复使用。
不同类型的细胞对血清的需求和耐受性不同,在进行新的细胞培养实验前,建议进行预实验,摸索最佳的血清添加比例和培养条件 。同时,注意观察细胞的生长状态,如细胞形态、增殖速度、存活率等,根据细胞状态及时调整培养条件。
在更换培养基时,尽量减少细胞暴露在空气中的时间,避免培养基干涸和细胞脱水。更换培养基的频率应根据细胞的生长速度和代谢情况而定,一般为 1 - 2 天更换一次,以保证细胞能够获得充足的营养物质和良好的生长环境 。
安全防护:血清中可能含有未知的生物活性物质,虽然经过严格检测,但在操作过程中仍需注意个人防护 。避免血清接触皮肤和眼睛,如不慎接触,应立即用大量清水冲洗,并根据情况就医。实验结束后,及时清洗实验器材和操作台,保持实验室环境整洁安全 。
细胞生长缓慢或不生长:
原因:可能是血清添加比例不合适、血清质量不佳、培养基营养成分不足、细胞污染或培养条件不适宜等 。
解决方法:尝试调整血清添加比例,增加或减少血清用量,观察细胞生长情况;检查血清的批号和质量检测报告,确认血清是否合格,必要时更换新批次的血清;检查培养基的配制是否正确,是否添加了足够的营养物质;对细胞进行微生物污染检测,如支原体检测等,若发现污染,及时采取措施处理;优化培养条件,如调整温度、CO₂浓度、湿度等,确保细胞处于适宜的生长环境 。
细胞出现大量死亡:
原因:可能是血清中含有毒素或有害物质、细胞受到微生物污染、消化过度、培养环境突然改变等 。
解决方法:检测血清中的内毒素含量和其他有害物质,若血清存在问题,更换新的血清;对细胞和培养环境进行微生物检测,找出污染源并进行处理;优化细胞消化步骤,控制消化时间和消化液浓度,避免消化过度;在更换培养基、转移细胞等操作时,尽量保持培养环境的稳定,减少对细胞的刺激 。
培养基出现浑浊:
原因:可能是培养基受到微生物污染、血清中存在杂质或沉淀、细胞代谢产物积累过多等 。
解决方法:对培养基进行微生物培养检测,确定是否污染,若污染,丢弃污染的培养基,并对培养设备和环境进行消毒;将血清进行低速离心,去除沉淀后再使用;增加培养基更换频率,及时清除细胞代谢产物,保持培养基的清洁 。