如何解读Qubit RNA IQ Assay Kit的检测结果？

　　如何解读Qubit RNA IQ Assay Kit的检测结果？
 

　　Invitrogen Qubit RNA IQ Assay Kit 是一种用于精确检测 RNA 质量和浓度的工具，以下是对其检测结果解读的一些要点：
 

　　浓度
 

　　数值含义：检测结果会给出 RNA 的浓度值，单位通常是 ng/μL。这个数值表示每微升样品中所含 RNA 的质量。
 

　　准确性：Qubit 系统采用荧光染料特异性地结合 RNA，能提供高精度的定量结果，受杂质干扰小，比传统的紫外分光光度法更准确。例如，若紫外分光光度法检测结果受蛋白质等杂质影响而偏高，Qubit RNA IQ Assay Kit 则能排除此类干扰，给出更真实的 RNA 浓度值。
 

　　RNA 完整性数(RIN)
 

　　数值范围与意义：RIN 值范围从 1 到 10，10 代表最完整的 RNA，通常认为 RIN 值≥7 表示 RNA 质量较好，适用于大多数下游应用，如 qRT - PCR、微阵列分析等；RIN 值在 5 - 7 之间，说明 RNA 有一定程度的降解，但可能仍适用于一些对 RNA 完整性要求不太高的实验，如普通 RT - PCR；RIN 值<5 则表明 RNA 降解严重，可能会影响实验结果的准确性和可靠性。
 

　　评估方法：该试剂盒通过分析 RNA 电泳图谱中 28S 和 18S rRNA 的相对强度以及它们与其他 RNA 条带的分布情况来计算 RIN 值，能直观地反映 RNA 的完整性。
 

　　28S/18S 比值
 

　　正常范围：对于真核生物，完整的 RNA 通常具有 28S/18S 比值在 1.8 - 2.2 之间。
 

　　比值变化含义：比值高于 2.2 可能表示 RNA 有降解，导致 18S rRNA 丢失相对较多；比值低于 1.8 可能意味着存在 RNA 的部分降解或污染，例如，可能有基因组 DNA 污染，影响了 28S rRNA 的条带强度，或者 RNA 在提取过程中受到了机械剪切力等因素的影响，使 28S rRNA 断裂，从而降低了该比值。
 

　　在解读检测结果时，需要综合考虑浓度、RIN 值和 28S/18S 比值等多个指标，以全面评估 RNA 的质量和浓度是否满足实验需求。同时，还应结合实验目的和后续应用来判断 RNA 样品是否合格。例如，对于构建 cDNA 文库，通常需要高质量、高浓度且完整性好的 RNA，即 RIN 值较高、28S/18S 比值正常且浓度足够的样品；而对于一些简单的基因表达分析实验，对 RNA 质量的要求可能相对宽松一些。