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目前有哪些比较热门的肿瘤单细胞制备技术?
基于酶解的试剂盒法
肿瘤组织快速解离试剂盒2:采用三阶酶控解离技术,由胶原酶 VI、中性蛋白酶及热灭活胎牛血清组成定向酶解系统。能空间选择性裂解肿瘤间质中的胶原纤维,含钙离子稳定剂保护膜结构,还有 RNase 抑制剂保护 RNA。配套渐进式筛网系统和离心涡旋技术,可将细胞活性维持在 93% 以上,且解离耗时短,仅 35 分钟,显著优于传统机械研磨法。
Miltenyi Tumor Dissociation Kit:专为从人类肿瘤组织温和快速地生成单细胞悬液而开发,针对高产量的肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞进行了优化,同时保留重要的细胞表面表位,非常适合与 gentlemacs™解离器结合,实现省时且可重复的单细胞悬液制备。
单细胞多组学测序技术 Parallel - seq1:由清华大学生命科学学院张强锋副教授课题组开发,结合了组合条形码标记与微液滴测序技术,实现 “微液滴过载" 策略。可高通量、低成本地在同一个单细胞中同步测量基因表达(scRNA - seq)和染色质可及性(scATAC - seq)。一次实验可并行分析数十万乃至百万级细胞,支持多样本的多组学联合分析,降低批次效应影响,单个细胞成本仅为现有技术的约 1/30。
机械解离与酶解结合法:通过机械离解和酶解离的组合,例如使用剪刀、镊子等器械先将肿瘤组织剪碎,再利用组织研磨器等进一步破碎,然后结合胶原酶 / 透明质酸酶混合物等进行酶解,最终获得较高存活率的单细胞悬浮液。这种方法可以充分发挥机械解离和酶解的优势,在保证细胞活性的同时,提高解离效率。
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