特异性荧光染料结合:试剂盒采用了对 miRNA 具有高度选择性的荧光染料 。这种荧光染料仅在与 miRNA 结合时,才会发出强烈的荧光信号,而与核糖体 RNA(rRNA)或较大的信使 RNA(mRNA,>1000 bp)等几乎不发生作用。当荧光染料与 miRNA 结合后,其荧光性质会发生显著改变,荧光强度大幅增强,从而能够准确报告样本中 miRNA 的浓度。即使样本中 miRNA 丰度极低,也能产生可被精确检测的信号,确保了对 miRNA 定量的准确性和特异性。
基于标准曲线的定量方法:使用试剂盒时,首先利用提供的稀释缓冲液对浓缩分析试剂进行稀释,然后加入样本(可接受 1µL 到 20µL 间的任意体积) 。将样本与稀释后的试剂混合均匀后,放入 Qubit 荧光计中。Qubit 荧光计会读取样本的荧光信号强度,并将其与试剂盒内预稀释 miRNA 标准品建立的标准曲线进行比对。通过这种方式,能够精准计算出样本中 miRNA 的浓度。整个过程操作简便,通常仅需较短时间即可完成,大大提高了实验效率。
出色的污染物耐受性:在实际实验中,RNA 样本常受到各种污染物的干扰,这些污染物可能会影响定量结果的准确性 。Qubit microRNA Assay Kit 对常见污染物具有出色的耐受性,即使样本中存在盐、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质等杂质,也基本不会对 miRNA 定量结果造成明显影响。这一特性使得在处理复杂样本时,如从细胞裂解物、血清、组织匀浆等来源提取的 RNA 样本,能够可靠地获得 miRNA 的浓度数据,为科研人员提供了极大的便利。
高灵敏度:该试剂盒能够准确检测到低至 0.5 ng 的 miRNA(在检测管中) ,在低丰度 miRNA 样本定量方面表现。许多生物学过程中,miRNA 的表达水平较低,传统的定量方法可能无法准确检测。而 Qubit microRNA Assay Kit 凭借其高灵敏度,能够有效检测这些微量的 miRNA,为深入研究 miRNA 在生理和病理状态下的功能变化提供了可能。例如在研究早期肿瘤发生过程中,一些关键 miRNA 的表达量变化极为细微,使用该试剂盒能够精准捕捉到这些变化,为肿瘤早期诊断标志物的筛选提供依据。
宽动态检测范围:试剂盒的核心动态检测范围为 5 – 500 ng/mL ,能够对初始 miRNA 样本浓度在 50 ng/mL 到 100 µg/mL 间的样品进行准确测定。这一宽动态范围使得它适用于多种类型的样本和实验需求。无论是表达量较低的稀有 miRNA,还是表达量较高的常见 miRNA,都能在该试剂盒的检测范围内获得准确的定量结果。在研究不同组织或细胞类型中 miRNA 的表达差异时,其宽动态检测范围能够满足对不同丰度 miRNA 的检测要求,全面揭示 miRNA 的表达谱特征。
高选择性:试剂盒中的荧光染料对 miRNA 相对于 rRNA 或大 mRNA 具有高度选择性 。在复杂的 RNA 样本中,rRNA 和大 mRNA 的含量往往远高于 miRNA,如果定量方法选择性不佳,很容易受到这些大量 RNA 的干扰,导致 miRNA 定量不准确。Qubit microRNA Assay Kit 能够有效排除 rRNA 和大 mRNA 的干扰,准确检测出 miRNA 的含量,为 miRNA 的精准定量提供了保障。在进行 miRNA 表达谱分析、miRNA 与疾病关联研究等实验中,高选择性确保了实验结果的可靠性,避免了因其他 RNA 干扰而产生的误判。
基础生物学研究:在基础生物学研究中,miRNA 参与了众多重要的生物学过程,如细胞增殖、分化、凋亡等 。Qubit microRNA Assay Kit 可用于准确测定不同细胞类型、组织或发育阶段中 miRNA 的含量,为研究 miRNA 的生物学功能和作用机制提供关键数据支持。例如在研究胚胎发育过程中,通过该试剂盒对不同发育时期胚胎细胞中 miRNA 的定量分析,有助于揭示 miRNA 在胚胎发育过程中的调控网络,深入了解胚胎发育的分子机制。
疾病诊断与研究:miRNA 在多种疾病的发生发展过程中发挥着重要作用,其表达水平的异常变化与疾病的诊断、预后和治疗密切相关 。在肿瘤研究领域,许多 miRNA 被发现可作为肿瘤标志物用于肿瘤的早期诊断和预后评估。Qubit microRNA Assay Kit 能够准确检测肿瘤组织或体液(如血液、尿液等)中 miRNA 的含量,为肿瘤的早期诊断、病情监测以及药物疗效评估提供有力工具。此外,在心血管疾病、神经系统疾病等其他疾病研究中,该试剂盒也可用于探索 miRNA 与疾病的关联,为疾病的发病机制研究和治疗靶点的筛选提供依据。
药物研发:在药物研发过程中,了解药物对 miRNA 表达的影响以及 miRNA 作为潜在药物靶点的作用至关重要 。Qubit microRNA Assay Kit 可用于检测药物处理后细胞或动物模型中 miRNA 的表达变化,评估药物的疗效和安全性。同时,通过对 miRNA 与药物相互作用机制的研究,有助于发现新的药物靶点,为开发更有效的治疗药物提供支持。例如在开发针对特定疾病的 miRNA 模拟物或抑制剂时,使用该试剂盒能够准确监测药物对目标 miRNA 的调控效果,优化药物研发流程。
样本要求:试剂盒适用于多种来源的 RNA 样本,包括细胞裂解物、组织匀浆、血清、血浆、唾液等 。但为确保实验结果的准确性,样本应尽可能保持完整,避免 RNA 降解。在样本采集和处理过程中,需严格遵循相关操作规程,使用无 RNase 的耗材和试剂。若样本中存在可能影响 miRNA 定量的杂质,如过多的蛋白质、多糖等,建议在使用试剂盒前进行适当的纯化处理。此外,由于 miRNA 在样本中的含量通常较低,应注意样本的保存条件,尽量避免反复冻融,以防止 miRNA 降解导致定量不准确。
实验操作流程:使用 Qubit microRNA Assay Kit 进行 miRNA 定量的操作流程相对简便 。首先,根据实验需求,使用试剂盒提供的稀释缓冲液将浓缩分析试剂稀释成工作液。接着,取适量(1µL 到 20µL)的 RNA 样本加入到稀释好的工作液中,充分混合均匀。将混合后的样品放入 Qubit 荧光计中,按照仪器操作指南启动检测程序,荧光计会自动读取荧光信号并计算出 miRNA 浓度。整个操作过程需在室温下进行,且要注意避免样品受到光照、污染等因素的影响。在操作过程中,应严格按照试剂盒说明书的要求进行,确保每个步骤的准确性和一致性,以获得可靠的实验结果。
存储条件:为保证试剂盒的性能稳定,Qubit microRNA Assay Kit 应存储于 2 - 8°C 的环境中 。在使用过程中,要尽量减少试剂盒的反复冻融次数,取用试剂后应及时放回冰箱保存。同时,要注意试剂盒的有效期,在有效期内使用,以确保实验结果的可靠性。此外,对于试剂盒中的标准品和工作液,也应按照说明书的要求进行保存和使用,避免因保存不当导致试剂失效或浓度不准确,影响实验结果。