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准备工作
配制适量的台盼蓝染液,一般使用 0.4% 的台盼蓝溶液,可将 0.4 克台盼蓝粉末溶解于 100 毫升磷酸缓冲盐溶液(PBS)中,过滤除菌后备用。
准备好细胞悬液,确保细胞悬液浓度适中,若细胞浓度过高,需进行适当稀释。
染色
取适量细胞悬液(如 100 微升),加入等体积的台盼蓝染液(100 微升),轻轻吹打混匀,使细胞与染液充分接触,室温下染色 3 - 5 分钟。
观察与计数
取少量染色后的细胞悬液,滴加到血细胞计数板上,盖上盖玻片。
在显微镜下观察,活细胞由于细胞膜具有完整性,能够排斥台盼蓝,因此不着色,呈现透明状;而死细胞的细胞膜失去完整性,台盼蓝可进入细胞内,使细胞染成蓝色。
选择计数板上合适的区域进行细胞计数,一般选取四个角的大方格和中央的大方格进行计数。分别记录活细胞(无色)和死细胞(蓝色)的数量。
计算细胞活性
根据以下公式计算细胞活性:细胞活性(%)=(活细胞数 / 细胞总数)×100%。例如,计数得到活细胞数为 400 个,死细胞数为 100 个,则细胞总数为 500 个,细胞活性 =(400/500)×100% = 80%。
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