会影响 Qubit RNA IQ Assay Kit 实验准确性的常见问题:
样本方面
RNA 降解:样本保存不当,如未及时低温保存或反复冻融,会使 RNA 发生降解。降解的 RNA 会导致 RIN 值降低,影响实验准确性,因为 Qubit RNA IQ Assay Kit 是基于完整 RNA 的荧光信号来评估其质量和浓度的。
样本污染:实验过程中,如果使用了被 RNase 污染的耗材、试剂或实验环境,会导致 RNA 被降解或产生假阳性结果。此外,样本中存在的蛋白质、盐离子、有机溶剂等杂质也会干扰荧光染料与 RNA 的结合,影响检测准确性。
样本浓度过高或过低:样本浓度超出试剂盒的检测范围,过高会使荧光信号饱和,无法准确测量;过低则会导致荧光信号微弱,误差增大。
试剂方面
仪器方面
操作方面
加样不准确:使用移液器加样时,如果操作不规范,如吸液速度过快、移液器量程选择不当、吸头内有气泡等,会导致加入的样本或试剂体积不准确,影响实验结果。
孵育时间和温度不当:染料与 RNA 的结合需要一定的孵育时间和合适的温度条件。孵育时间过短或过长、温度过高或过低,都会影响染料与 RNA 的结合效率,从而影响检测结果的准确性。
检测环境不稳定:实验环境的温度、湿度、光照等条件不稳定,可能会对荧光信号产生影响。例如,温度变化较大时,荧光染料的荧光量子产率可能会发生改变,导致检测结果不准确。