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会影响 Qubit RNA IQ Assay Kit 实验准确性的常见问题:

更新时间:2025-06-13      点击次数:43
会影响 Qubit RNA IQ Assay Kit 实验准确性的常见问题:


  • 样本方面

    • RNA 降解:样本保存不当,如未及时低温保存或反复冻融,会使 RNA 发生降解。降解的 RNA 会导致 RIN 值降低,影响实验准确性,因为 Qubit RNA IQ Assay Kit 是基于完整 RNA 的荧光信号来评估其质量和浓度的。

    • 样本污染:实验过程中,如果使用了被 RNase 污染的耗材、试剂或实验环境,会导致 RNA 被降解或产生假阳性结果。此外,样本中存在的蛋白质、盐离子、有机溶剂等杂质也会干扰荧光染料与 RNA 的结合,影响检测准确性。

    • 样本浓度过高或过低:样本浓度超出试剂盒的检测范围,过高会使荧光信号饱和,无法准确测量;过低则会导致荧光信号微弱,误差增大。

  • 试剂方面

    • 试剂过期或变质:试剂盒中的试剂都有一定的保质期,过期或保存条件不当导致试剂变质,会使荧光染料的性能发生改变,无法与 RNA 正常结合,从而影响检测结果的准确性。

    • 试剂混合不均匀:在将 Qubit RNA IQ 染料与样本混合时,如果没有充分混匀,会导致染料与 RNA 结合不充分,荧光信号不稳定,影响浓度和质量指标的准确性。

  • 仪器方面

    • 仪器未校准:Qubit 仪器若未定期校准,其光学系统、荧光检测模块等可能出现偏差,导致检测结果不准确。例如,仪器的波长准确性发生偏移,会使荧光信号的检测出现误差。

    • 仪器故障:仪器的部件故障,如光源老化、检测器故障等,会影响荧光信号的正常检测。光源老化会使激发光强度不足,导致荧光信号减弱,进而影响测量结果。

  • 操作方面

    • 加样不准确:使用移液器加样时,如果操作不规范,如吸液速度过快、移液器量程选择不当、吸头内有气泡等,会导致加入的样本或试剂体积不准确,影响实验结果。

    • 孵育时间和温度不当:染料与 RNA 的结合需要一定的孵育时间和合适的温度条件。孵育时间过短或过长、温度过高或过低,都会影响染料与 RNA 的结合效率,从而影响检测结果的准确性。

    • 检测环境不稳定:实验环境的温度、湿度、光照等条件不稳定,可能会对荧光信号产生影响。例如,温度变化较大时,荧光染料的荧光量子产率可能会发生改变,导致检测结果不准确。



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