常用的蛋白质转印试剂有哪些常用的蛋白质转印试剂有哪些

Towbin 缓冲液：经典的蛋白质转印缓冲液，由 Tris、甘氨酸和甲醇组成。Tris 和甘氨酸维持缓冲体系的 pH 稳定，甲醇能降低凝胶的孔径，防止蛋白质在转印过程中扩散，有助于蛋白质从凝胶向膜上转移。常用于半干转印和湿转印，适用于大多数蛋白质的转印，但甲醇对某些蛋白质的活性可能有影响 。

CAPS 缓冲液：主要成分是 3 - 环己胺 - 1 - 丙磺酸（CAPS）和甲醇，pH 一般调节至 10.5 左右。相比 Towbin 缓冲液，CAPS 缓冲液更适合碱性条件下对蛋白质活性要求较高的转印，尤其适用于高分子量蛋白质和糖蛋白的转印，能较好地保持蛋白质的生物活性 。

Pierce 1 - Step Transfer Buffer（Thermo Scientific）：可用于从聚丙烯酰胺凝胶（SDS - PAGE）到硝酸纤维素或 PVDF 膜的快速半干转印，适用于分子量在 10 - 300kDa 的蛋白质。该缓冲液使用方便，能有效促进蛋白质的转移，简化转印流程，节省实验时间 。

硝酸纤维素膜（NC 膜）：蛋白质结合能力强，非特异性吸附低，能与蛋白质通过疏水作用和离子键结合。其优点是价格相对较低，检测信号清晰，适用于多种检测方法，如化学发光法、显色法等。但机械强度较差，易脆裂，操作时需小心，且在潮湿环境中容易变形 。

聚偏二氟乙烯膜（PVDF 膜）：具有较高的蛋白质结合能力和化学稳定性，机械强度好，不易破损，便于操作和后续处理，如多次重复检测。疏水性强，使用前需用甲醇等有机溶剂进行预处理以活化膜表面，增强蛋白质结合力，常用于 Western Blot 等对蛋白质检测要求较高的实验 。

尼龙膜：机械强度高，耐磨损，能耐受较剧烈的实验条件。与蛋白质的结合能力较强，适用于核酸和蛋白质的转印。但尼龙膜的非特异性吸附相对较高，在使用时需要进行封闭处理以降低背景信号 。

脱脂奶粉：常用的封闭剂之一，主要成分是酪蛋白，价格便宜，能有效封闭膜上的非特异性结合位点，降低背景信号。但由于含有少量生物素和碱性磷酸酶，在使用生物素 - 亲和素系统或碱性磷酸酶标记的二抗进行检测时，可能会产生非特异性信号 。

牛血清白蛋白（BSA）：是一种纯度较高的封闭试剂，非特异性结合低，适用于各种检测系统，尤其在对背景要求严格的实验中表现良好。不过价格相对脱脂奶粉较高，对于大规模实验可能成本较高 。

Blocking One Solution（Nacalai Tesque）：一种现成的封闭溶液，使用方便，封闭效果好，能有效减少非特异性背景，可用于多种免疫检测实验，节省实验准备时间 。

DAB（3,3'- 二氨基联苯胺）：经典的显色底物，与 HRP 反应后产生棕色沉淀，显色结果直观，便于观察和拍照记录。但 DAB 具有一定的毒性，使用时需注意防护 。

NBT/BCIP（硝基蓝四唑 / 5 - 溴 - 4 - 氯 - 3 - 吲哚磷酸）：常用于碱性磷酸酶（AP）标记的二抗检测，反应后产生蓝紫色沉淀，灵敏度较高，适用于多种膜材料 。

Amersham ECL Start Western Blotting Detection Reagent（Cytiva）：基于鲁米诺的化学发光底物，灵敏度高，适用于常规和验证性 Western Blotting 实验。与辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗结合后，在化学反应中产生光信号，通过曝光显影呈现蛋白质条带 。

SuperSignal West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate（Thermo Scientific）：具有超高灵敏度，能够检测到低丰度蛋白质，适用于需要检测微量蛋白质的实验。发光信号强且稳定，可延长曝光时间以获取更清晰的条带 。

化学发光底物：

显色底物：

一抗：特异性识别目标蛋白质的抗体，根据来源可分为鼠源、兔源、羊源等；根据制备方法可分为多克隆抗体和单克隆抗体。多克隆抗体能识别多个抗原表位，灵敏度较高，但特异性可能相对较低；单克隆抗体特异性强，识别单一抗原表位，但可能存在亲和力较低的问题 。

二抗：与一抗结合的抗体，通常标记有酶（如 HRP、AP）或荧光基团。通过与一抗结合，二抗可将标记物引入检测体系，实现对目标蛋白质的检测。标记有酶的二抗配合相应的底物进行显色或化学发光检测，标记有荧光基团的二抗则可通过荧光显微镜等设备进行观察和分析 。