准备工作:在使用前,将 CHT4-SD100-002 细胞计数板和盖玻片用 75% 乙醇擦拭干净,然后用无尘纸擦干,确保计数板表面无污渍和杂质。同时,准备好细胞悬液,并根据细胞浓度进行适当稀释,使细胞密度适中,便于计数。
加样操作:将盖玻片轻轻放置在计数板的凹槽上,确保盖玻片与计数板紧密贴合,形成计数室。用微量移液器吸取适量的细胞悬液,将移液器的枪头靠近计数室边缘,缓慢滴加细胞悬液,使细胞悬液通过毛细作用自动充满计数室。注意不要让细胞悬液溢出计数室,也不要产生气泡,以免影响计数结果。
显微镜观察与计数:将加样后的计数板放置在显微镜载物台上,先用低倍物镜(如 10 倍物镜)找到计数室的位置,然后转换到合适的高倍物镜(如 20 倍物镜)进行观察。按照计数原则,对计数室内的细胞进行计数,并记录每个计数区域的细胞数量。
数据计算与分析:根据计数结果,使用上述计数公式计算细胞悬液的浓度。为了提高数据的准确性,可以对多个计数区域进行计数,并计算平均值。同时,记录实验过程中的相关信息,如细胞来源、培养条件、稀释倍数等,以便后续数据分析和实验总结。
样品处理:细胞悬液的制备质量直接影响计数结果。在制备细胞悬液时,要确保细胞充分分散,避免细胞团聚。可以通过轻柔吹打、振荡等方式使细胞均匀分布。同时,对于一些容易贴壁的细胞,在消化过程中要掌握好消化时间和消化液浓度,防止细胞损伤或消化。
加样技巧:加样时要注意操作手法,避免产生气泡和液体溢出。如果计数室中出现气泡,会导致计数区域内细胞数量不准确;而液体溢出则会污染计数板和显微镜载物台,影响后续实验。此外,加样后要静置片刻,让细胞沉降到计数室底部,再进行显微镜观察,以获得更准确的计数结果。
清洁与保养:使用完毕后,立即将计数板和盖玻片进行清洗。先用清水冲洗掉残留的细胞悬液,然后用 75% 乙醇浸泡消毒,最后用无尘纸擦干并妥善保存。避免使用硬物刮擦计数板表面,防止损坏计数室的刻度和结构。定期对计数板进行校准和检查,确保其计数准确性。
生命科学研究:在细胞生物学、分子生物学、免疫学等基础研究领域,CHT4-SD100-002 细胞计数板被广泛应用于细胞培养、细胞增殖、细胞凋亡等实验中的细胞数量测定。例如,在研究不同生长因子对细胞增殖的影响时,科研人员需要定期对细胞进行计数,以绘制细胞生长曲线,评估生长因子的作用效果。
细胞治疗:在细胞治疗技术中,如 CAR-T 细胞治疗、干细胞治疗等,准确计数细胞是确保治疗安全性和有效性的关键环节。通过使用细胞计数板,可以精确控制细胞的输入剂量,避免因细胞数量过多或过少而导致的治疗风险。
药物研发:在药物筛选和药效评价实验中,细胞计数是评估药物对细胞毒性和增殖抑制作用的重要指标。通过比较药物处理前后的细胞数量变化,可以判断药物的活性和作用机制,为药物研发提供重要的数据支持。
准确性高:CHT4-SD100-002 细胞计数板的精密结构设计和标准化计数区域,减少了人为误差,能够提供较为准确的细胞计数结果。通过严格遵循计数方法和操作规范,多次重复计数取平均值,可以进一步提高数据的准确性和可靠性。
操作简便:该计数板的使用方法相对简单,无需复杂的仪器设备和专业技能培训,科研人员和技术人员经过短期培训即可掌握操作要点。在日常实验和生产过程中,能够快速完成细胞计数工作,提高工作效率。
成本效益好:与一些自动化细胞计数设备相比,CHT4-SD100-002 细胞计数板的价格较为亲民,且使用寿命长,维护成本低。对于一些预算有限的实验室和企业来说,是一种经济实用的细胞计数工具。
主观性较强:在显微镜下进行细胞计数时,计数结果容易受到操作人员主观因素的影响,如细胞识别能力、计数区域选择等。不同操作人员对同一细胞悬液进行计数,可能会得到不同的结果。因此,需要操作人员具备一定的经验和熟练的操作技能,并严格按照操作规范进行计数。
通量较低:CHT4-SD100-002 细胞计数板一次只能对少量样本进行计数,对于大规模的细胞计数需求,如高通量药物筛选实验,操作效率较低。在处理大量样本时,需要耗费较多的时间和人力。
不适用于特殊细胞:对于一些体积较小、形态不规则或容易聚集成团的细胞,在显微镜下计数难度较大,可能会导致计数误差。此外,对于一些含有杂质或碎片的细胞悬液,也会影响细胞计数的准确性。在这种情况下,可能需要结合其他细胞计数方法或对样本进行进一步处理。