在发酵工程领域,蛋白胨虽为微生物生长提供优质氮源及多种营养成分,但发酵过程的顺利进行和目标产物的高效合成,离不开多种营养物质的协同作用。除蛋白胨外,还有以下几类重要营养物质发挥着关键作用。
一、碳源
碳源是微生物细胞结构物质和代谢产物中碳架的来源,同时为微生物生长和代谢提供能量。在发酵工程中,碳源的种类和浓度对微生物的生长速率、代谢途径以及发酵产物的产量和质量都有显著影响。
(一)糖类碳源
糖类是碳源,可分为单糖、双糖和多糖。葡萄糖作为单糖,是微生物最易利用的碳源,能够快速被微生物吸收利用,在发酵初期可促进微生物快速生长繁殖,如在酿酒酵母发酵生产酒精过程中,葡萄糖可迅速被酵母细胞摄取并通过糖酵解途径转化为丙酮酸,进而生成酒精 。蔗糖、麦芽糖等双糖需在微生物分泌的水解酶作用下分解为单糖后才能被利用。多糖类如淀粉、纤维素等,来源广泛且成本较低,在工业发酵中应用普遍。例如,在淀粉酶发酵生产中,以淀粉为碳源,微生物可分泌淀粉酶将其水解为葡萄糖,既满足自身生长需求,又可诱导淀粉酶的合成 。
(二)非糖类碳源
除糖类外,甘油、有机酸(如醋酸、乳酸)、醇类(如甲醇)等也可作为碳源。甘油常用于一些对碳源利用有特殊要求的微生物发酵,如某些产甘油酯的微生物发酵。有机酸可直接参与微生物的代谢过程,在特定发酵中具有优势。甲醇则是甲基营养型微生物的重要碳源,这类微生物能够利用甲醇进行生长和代谢,在一些特殊代谢产物的发酵生产中有重要应用 。
二、氮源(非蛋白胨类)
氮源是微生物合成蛋白质、核酸等含氮物质的重要原料,除蛋白胨外,还有无机氮源和其他有机氮源。
(一)无机氮源
无机氮源包括铵盐(如硫酸铵、氯化铵)、硝酸盐(如硝酸钠、硝酸钾)等。铵盐中的铵离子可直接被微生物吸收利用,参与氨基酸等含氮物质的合成,在发酵培养基中常作为速效氮源 。硝酸盐需要在微生物的硝酸还原酶作用下,先还原为亚硝酸盐,再进一步还原为铵离子才能被利用,其作用相对缓慢,可作为迟效氮源 。在谷氨酸发酵中,适量添加硫酸铵可促进菌体生长和谷氨酸合成;而在一些抗生素发酵中,无机氮源与有机氮源配合使用,能够更好地满足微生物不同生长阶段的需求 。
(二)其他有机氮源
酵母粉富含多种氨基酸、维生素和微量元素,是发酵工程中常用的有机氮源,可为微生物提供丰富的营养,促进其生长和代谢产物合成。玉米浆是玉米淀粉生产过程中的副产物,含有丰富的可溶性蛋白、多肽、氨基酸、糖类等成分,具有营养丰富、价格低廉等特点,在抗生素、氨基酸等发酵生产中广泛应用 。此外,豆饼粉、鱼粉等也是常见的有机氮源,它们含有不同的氨基酸组成和营养成分,可根据发酵需求进行选择和搭配 。
三、无机盐
无机盐在发酵过程中具有多种重要功能,如参与微生物细胞的组成、调节细胞渗透压、维持酶的活性等。
(一)大量元素
大量元素包括磷、硫、镁、钾、钙等。磷酸盐是微生物生长过程中必需的营养物质,它参与核酸、磷脂等生物大分子的合成,同时在能量代谢中发挥重要作用,如在 ATP 的合成和分解过程中起关键作用 。硫酸盐是合成含硫氨基酸(如半胱氨酸、蛋氨酸)和辅酶的原料。镁离子可激活多种酶的活性,如己糖激酶、异柠檬酸脱氢酶等,对微生物的糖代谢、三羧酸循环等代谢途径有重要影响 。钾离子可调节细胞内渗透压,维持细胞的正常生理功能,同时对某些酶的活性也有调节作用 。钙离子在细菌芽孢形成、细胞膜稳定性等方面具有重要作用 。
(二)微量元素
微量元素包括铁、锌、锰、铜、钴等,虽然微生物对它们的需求量极少,但却是微生物生长和代谢。铁是细胞色素、过氧化氢酶等酶的组成成分,参与电子传递和氧化还原反应 。锌是许多酶的活性中心组成部分,如乙醇脱氢酶、乳酸脱氢酶等,对微生物的代谢过程有重要影响 。锰离子可激活某些水解酶和转移酶的活性,在微生物的糖代谢和氨基酸代谢中发挥作用 。这些微量元素在发酵过程中通常以痕量存在,但其缺乏或过量都会影响微生物的生长和代谢产物合成 。
四、生长因子
生长因子是一类对微生物正常代谢且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物,主要包括维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶及其衍生物等。
(一)维生素
维生素在微生物代谢中作为辅酶或辅基的组成成分,参与各种代谢反应。例如,维生素 B 族中的硫胺素(维生素 B1)是丙酮酸脱氢酶系的辅酶成分,参与糖的有氧氧化过程;核黄素(维生素 B2)是黄素蛋白的辅基,在电子传递链中起重要作用 。不同微生物对维生素的需求存在差异,有些微生物能够自身合成部分维生素,而有些则需要在培养基中添加外源维生素才能正常生长 。
(二)氨基酸
除作为氮源参与蛋白质合成外,某些氨基酸对特定微生物是必需的生长因子。例如,对于一些乳酸菌,由于自身不能合成某些氨基酸(如组氨酸、异亮氨酸等),必须在培养基中添加这些氨基酸才能正常生长 。
(三)嘌呤和嘧啶及其衍生物
嘌呤和嘧啶及其衍生物是合成核酸的重要原料,微生物缺乏这些物质时,核酸合成受阻,生长受到抑制 。在发酵生产核苷酸类物质时,添加适量的嘌呤和嘧啶及其衍生物,可促进相关代谢途径,提高核苷酸的产量 。
发酵工程中,除蛋白胨外,碳源、氮源、无机盐和生长因子等营养物质各自承担着功能。它们之间相互配合、协同作用,共同为微生物的生长、代谢和发酵产物合成创造适宜的营养环境。在实际发酵生产中,根据不同的微生物种类和发酵目标,合理选择和优化这些营养物质的种类、浓度和配比,是实现高效发酵、提高发酵产物产量和质量的关键。