SDS-PAGE 一步法凝胶快速制备试剂盒使用经验技巧分享

提前平衡试剂温度：从冰箱取出试剂盒后，建议将试剂放置在室温下平衡 15 - 30 分钟再使用。这样做能避免因试剂温度过低，在混合过程中导致溶液局部过冷，影响聚合加速剂的活性，进而影响凝胶聚合效果。比如在冬天，直接使用低温试剂可能使凝胶聚合时间延长，甚至出现聚合情况。

精准量取液体：使用移液枪量取去离子水或缓冲液时，要确保移液枪的量程合适且校准准确。对于小体积液体量取，可选择精度更高的微量移液器，量取时缓慢吸液和放液，避免产生气泡和误差。此外，量取不同液体时，及时更换枪头，防止交叉污染影响凝胶质量。

预混试剂充分摇匀：如果试剂盒中的预混试剂长时间放置出现分层现象，使用前需将其充分摇匀。可以上下颠倒试剂瓶多次，或者使用涡旋振荡器低速振荡，使各成分重新均匀混合，确保凝胶各组分浓度一致，保障凝胶质量稳定。

灌注凝胶的小窍门：灌注凝胶时，可先将电泳槽倾斜一定角度（约 30° - 45°），然后将凝胶溶液沿电泳槽一侧缓慢倒入。这样能减少溶液与空气的接触面积，有效避免气泡产生。同时，在倒入凝胶溶液的过程中，保持匀速缓慢的速度，有助于使凝胶溶液更均匀地填充凝胶腔。

梳子处理技巧：插入梳子前，可在梳子的齿上涂抹一层薄薄的凡士林或电泳缓冲液，这样能在拔梳子时起到润滑作用，使梳子更容易拔出，减少对加样孔的损坏。拔梳子的最佳时机是在凝胶刚刚聚合完成且仍具有一定弹性时，此时轻轻垂直向上拔出梳子，能保持加样孔的完整形状。

气泡处理经验：若在灌注过程中不慎产生气泡，除了用细针挑破外，还可以用注射器连接细长的针头，将针头插入气泡下方，缓慢抽出气泡。如果气泡较多且分布在凝胶表面，可将灌注好凝胶的电泳槽放置在水平摇床上，以低速摇晃几分钟，利用离心力使气泡集中到表面后再进行处理。

聚合异常处理：如果发现凝胶在预期时间内未聚合，首先检查试剂是否在有效期内，以及试剂混合比例是否准确。若试剂没问题，可尝试将凝胶放置在温度稍高（不超过 30℃）且干燥的环境中，加速聚合反应。但要注意温度不宜过高，否则会导致凝胶孔径不均。若凝胶聚合速度过快，出现局部过热或凝胶表面不平整的情况，可适当降低环境温度，或减少聚合加速剂的用量（若试剂盒允许调整）。

条带异常分析：当电泳后出现条带模糊、拖尾或扭曲等异常情况时，除了考虑样品和电泳条件的因素外，也可能与凝胶制备有关。若凝胶中存在微小颗粒或杂质，会影响蛋白质迁移，导致条带异常。此时可检查试剂混合是否充分，器具是否清洁干净。若凝胶浓度不均匀，也会造成条带分离效果差，这就需要严格把控试剂配比和混合过程。