细胞培养长期研究中，TrypLE Express酶的使用注意事项有哪些？

贴壁细胞系：像中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、人胚肾 293 细胞（HEK 293）这类常见的贴壁细胞系，通常贴壁较为紧密。TrypLE Express 酶能够特异性地裂解赖氨酸和精氨酸 C - 末端的肽键，有效解离细胞与培养皿表面的连接。在长期培养中，该酶温和的作用特性不会对细胞表面标志物造成明显破坏，例如多次传代后，HEK 293 细胞表面的相关抗原标志物表达依然稳定，细胞形态和生长速率也能保持相对稳定，保证了实验的连续性和结果的可靠性。不过，由于不同贴壁细胞系贴壁强度存在差异，在使用 TrypLE Express 酶时，需要针对具体细胞系摸索合适的作用时间和浓度，以达到最佳解离效果 。

悬浮细胞系：对于悬浮生长的细胞系，如 Jurkat 细胞，虽然不存在贴壁解离的问题，但在细胞传代、分选等操作中也会用到 TrypLE Express 酶。研究表明，相较于传统胰蛋白酶，TrypLE Express 酶处理 Jurkat 细胞后，细胞表面 CD2 等标志物无明显损失，细胞活力和功能得以较好维持。在长期培养过程中，能够减少对细胞生长和代谢的影响，使细胞保持良好的增殖状态，为后续的细胞功能研究、药物筛选等实验提供稳定的细胞来源 。

原代人角质化细胞：原代细胞对外部环境变化较为敏感，TrypLE Express 酶非动物源性的特点为其提供了更安全的解离环境，避免了传统动物源性酶可能引入的病原体风险。在原代人角质化细胞的长期培养中，使用该酶能够在保证细胞解离效果的同时，减少对细胞的损伤，维持细胞的正常生理功能。细胞可以保持良好的分化特性，细胞间的连接结构和细胞表面的特异性蛋白表达相对稳定，有助于深入研究角质化细胞的生物学特性和相关疾病机制 。

原代神经元细胞：神经元细胞较为脆弱，对酶的作用更为敏感。TrypLE Express 酶成分均一、纯度高的特性，使其在解离原代神经元细胞时，能将对细胞的损害降到。在长期培养中，可较好地保留神经元细胞的突触结构和电生理特性，细胞的存活时间和功能维持时间显著延长，为神经系统疾病研究、神经再生研究等提供了更优质的细胞模型 。

胚胎干细胞：胚胎干细胞具有自我更新和多向分化潜能，在其长期培养过程中，对细胞状态的维持要求。TrypLE Express 酶温和的作用方式不会影响胚胎干细胞的这些特性，多次传代后，细胞依然能够保持较高的干性，细胞表面的干性标志物如 Oct4、Sox2 等表达稳定。这使得科研人员能够利用该酶进行胚胎干细胞的传代、扩增和诱导分化等操作，为干细胞治疗、发育生物学研究等领域提供可靠的细胞资源 。

诱导多能干细胞（iPSCs）：iPSCs 同样需要在培养过程中维持良好的细胞状态。TrypLE Express 酶在 iPSCs 的长期培养中，既能实现高效的细胞解离，又不会对细胞的重编程状态和分化能力产生明显影响。细胞可以稳定地进行传代，且在诱导分化为不同细胞类型时，能够保持正常的分化潜能和效率，有助于推动 iPSCs 在疾病建模、药物研发等方面的应用 。