SDS-PAGE 一步法凝胶快速制备试剂盒使用注意事项​ ​

试剂检查：使用前需仔细检查试剂盒各组分的包装是否完好，是否在有效期内。若发现试剂出现浑浊、变色、结块等异常现象，切勿使用，避免影响凝胶质量和实验结果。例如，预混试剂若出现明显沉淀，可能导致凝胶聚合不均匀，影响蛋白质分离效果。

器具清洁：确保所有用于凝胶制备的器具，如容器、移液枪、搅拌棒等，均经过严格清洗和干燥处理。残留的杂质、油污或其他化学物质可能干扰凝胶聚合反应，或在电泳过程中影响蛋白质迁移，导致条带异常。例如，未洗净的容器可能含有微量金属离子，影响聚丙烯酰胺的聚合。

严格遵循配比：务必按照试剂盒说明书规定的比例，准确加入去离子水或缓冲液与预混试剂混合。试剂比例不当会直接影响凝胶浓度、交联度和缓冲能力，进而改变凝胶孔径大小和电泳性能。如加水过多会使凝胶浓度降低，蛋白质迁移速度加快，条带分辨率下降；加水过少则凝胶过硬，蛋白质难以进入凝胶，出现条带拖尾或无法分离的情况。

充分均匀混合：混合过程中，应确保试剂充分溶解和均匀分散。可使用移液枪反复吹打或搅拌棒轻柔搅拌，但要避免剧烈搅拌产生大量气泡。气泡的存在不仅会在凝胶中形成空洞，影响凝胶的均匀性和完整性，还可能导致蛋白质样品在电泳时迁移路径改变，造成条带变形。若不慎产生气泡，可将混合液静置片刻，待气泡自然排出后再进行灌注。

避免气泡残留：灌注凝胶溶液时，动作要平稳迅速，尽量减少溶液与空气的接触，防止气泡进入凝胶腔。可将容器倾斜，使溶液沿电泳槽壁缓慢流入，若发现凝胶腔内有气泡，可用细针小心挑破排出。残留气泡会在凝胶中形成不规则孔洞，阻碍蛋白质迁移，使条带出现断裂或缺失。

控制聚合条件：凝胶聚合过程受温度、湿度等环境因素影响较大。应将灌注好的凝胶置于适宜的环境中进行聚合，一般建议在室温（20 - 25℃）下静置，避免温度过高或过低。温度过高会使凝胶聚合速度过快，导致凝胶孔径不均匀；温度过低则聚合时间延长，甚至可能无法聚合。同时，要保持环境干燥，潮湿环境可能使凝胶吸收水分，影响其理化性质。

正确拔取梳子：待凝胶聚合后，小心拔取梳子。拔梳时应垂直向上缓慢用力，避免晃动或倾斜，防止破坏加样孔的形状和完整性。加样孔受损会导致样品在加样时溢出或分布不均，影响电泳结果的准确性。

合理保存剩余试剂：试剂盒未使用完的试剂应按照要求密封保存，置于规定的温度环境中（通常为 4℃或 -20℃）。避免试剂长时间暴露在空气中，防止其吸湿、氧化或被微生物污染。对于含特殊成分（如聚合加速剂）的试剂，更要注意保存条件，防止其活性丧失，影响后续使用效果。