全国服务咨询热线:
18501609238
18501609238
快速取材，减少组织损伤：动物处死后或临床样本获取后，需在 30 分钟内完成取材（尤其对脑组织、肝脏等易自溶组织），避免组织细胞因缺氧、酶解出现形态改变。取材时使用锋利的解剖刀（如樱花 SAKURA 病理专用刀，货号 S350），避免反复切割导致组织挤压变形，切面需平整，厚度控制在 3-5 mm（过厚易导致冷冻不均，过薄易破碎）。
针对性去除杂质与多余组织：取材后需立即清除组织表面的血液、脂肪、筋膜等杂质（可用生理盐水轻轻冲洗，避免用力擦拭）。例如，脑组织取材后需去除脑膜与血管，脂肪组织需剔除周边结缔组织，否则杂质会影响包埋剂与组织的结合，导致切片时杂质脱落形成空洞。
组织定向标记：若实验需明确组织极性（如皮肤的表皮 - 真皮方向、肠道的黏膜 - 浆膜方向），取材后可用标记笔在组织特定部位做标记（选择樱花 SAKURA 低荧光标记笔，避免干扰后续免疫荧光实验），或通过包埋时的摆放位置固定方向（如将表皮面朝下，便于切片时识别）。
选择适配的固定方式：
若后续需进行 HE 染色、免疫组化，可采用 4% 多聚甲醛（PFA）室温固定 15-30 分钟（根据组织大小调整，如 1 cm³ 组织固定 20 分钟），固定后用 PBS 冲洗 3 次（每次 5 分钟），去除残留固定液，避免固定过度导致组织变硬、难切片；
若进行酶活性检测、脂质染色，需避免固定，采用 “新鲜组织直接冷冻"，但需在 - 80℃液氮中快速速冻（＜5 分钟），防止组织内水分形成大冰晶（大冰晶会破坏细胞结构，导致切片出现孔洞）。
低温保护剂的合理使用：
对神经组织、软骨等易脆组织，可在包埋前用 10%-20% 蔗糖溶液（溶于 PBS）4℃浸泡 2-4 小时（组织沉底即可），蔗糖可渗透至细胞内，降低组织冰点，减少冷冻过程中冰晶的形成，提升切片韧性。使用樱花 SAKURA 高黏附型 OCT 包埋剂（货号 4587）时，蔗糖处理后的组织黏附性可提升 20%，避免切片时组织与包埋剂分离。
根据实验类型选对包埋剂型号：
常规 HE 染色、组织形态观察：选择樱花 SAKURA 常规型 OCT 包埋剂（货号 4583），其低结晶配方可确保切片完整，性价比高；
免疫荧光、荧光原位杂交（FISH）：必须选择低荧光型 OCT 包埋剂（货号 4585），避免包埋剂自身荧光干扰目标信号，实验前可通过荧光显微镜预检测（激发波长 488 nm 下，荧光强度应＜50 RFU）；
脂肪、软骨、骨骼等特殊组织：优先使用高黏附型 OCT 包埋剂（货号 4587），其 APTES 黏附促进剂可增强组织与包埋剂的结合力，切片完整率提升至 85% 以上。
包埋剂提前预冷，避免气泡产生：
包埋前 1 小时将 OCT 包埋剂放入 4℃冰箱预冷（无需冷冻，避免结晶），预冷后的包埋剂黏度更稳定，倾倒时不易产生气泡；
向包埋模具（如樱花 SAKURA 一次性包埋盒，货号 T200）中加入包埋剂时，需沿模具壁缓慢倾倒，若出现气泡，可用移液器枪头轻轻挑破，气泡会导致切片出现 “空白区"，影响观察。
组织居中摆放，避免边缘效应：
将处理好的组织放入包埋模具中央，确保组织四周均有 OCT 包埋剂包裹（包埋剂厚度≥2 mm），避免组织紧贴模具壁（模具壁冷冻速度快，易导致组织边缘冷冻不均，切片时边缘断裂）。
对小组织（如直径＜2 mm 的淋巴结），可先用少量包埋剂在模具底部铺一层薄垫，再将组织放在垫上，防止组织下沉至模具底部，导致切片时无法完整获取组织。
梯度速冻，减少冰晶形成：
不建议将组织直接放入液氮中速冻（易导致组织表面瞬间结冰，内部水分无法及时排出，形成大冰晶），推荐 “梯度速冻法"：先将包埋模具放入 - 20℃冷冻切片机冷冻室预冷 10 分钟，待包埋剂表面凝固后，再转移至 - 80℃冰箱冷冻 30 分钟（或液氮上方 5 cm 处熏蒸 10 分钟），使组织从外到内缓慢冷冻，冰晶直径可控制在 5 μm 以下，避免细胞结构破坏。
根据组织类型调整冷冻温度：
柔软组织（如脑组织、肝脏）：冷冻温度控制在 - 18~-20℃，温度过高易导致切片黏连在刀片上，温度过低会使组织变脆，切片断裂；
坚硬组织（如皮肤、软骨）：冷冻温度需降至 - 22~-25℃，增强组织硬度，便于切片，但需避免温度过低（＜-30℃），否则组织会出现 “崩裂"；
脂肪组织：因脂肪导热性差，冷冻温度需稳定在 - 20℃，且冷冻时间需延长至 1 小时以上，确保脂肪凝固，否则切片时脂肪细胞易破裂，出现油滴。
动态调整温度，避免温度波动：
切片过程中，冷冻切片机的温度会因开门取放样品、刀片摩擦产热出现波动（±2℃），需每隔 30 分钟观察温度显示，若波动超过 ±1℃，需暂停切片，待温度稳定后再继续。使用樱花 SAKURA 低结晶 OCT 包埋剂时，即使温度有轻微波动，也能减少结晶产生，切片完整率保持在 90% 以上。
切片厚度选择：适配实验需求：
常规组织形态观察（HE 染色）：切片厚度 5-8 μm，过薄易破碎，过厚会导致细胞重叠，影响形态判读；
免疫荧光实验：切片厚度 3-5 μm，薄切片可减少抗体渗透时间，降低非特异性染色，同时减少 OCT 包埋剂用量，降低荧光干扰；
连续切片（如脑组织冠状面连续切片）：厚度控制在 5 μm，且需确保每片切片的厚度偏差＜0.5 μm（可通过冷冻切片机的厚度校准功能实现），避免因厚度不均导致后续拼接困难。
切片速度：“慢切为主，匀速推进"：
切片速度控制在 2-5 mm/s（根据组织硬度调整），柔软组织需慢切（2 mm/s），避免组织拉伸变形；坚硬组织可稍快（5 mm/s），但需保持匀速，避免速度忽快忽慢导致切片出现 “波纹"。
切片时刀片需与组织切面呈 15°-20° 角（非垂直切割），角度过小易导致切片挤压，角度过大易切断组织，可通过调整冷冻切片机的刀片支架角度实现最佳切割角度。
根据组织类型选对刀片：
常规软组织（肝脏、肾脏）：选择樱花 SAKURA 高碳钢刀片（货号 S450），刀刃锋利度高，可减少组织挤压；
坚硬组织（皮肤、骨骼）：使用碳化钨刀片（货号 S600），耐磨性强，使用寿命是高碳钢刀片的 3 倍，避免因刀片磨损导致切片出现刀痕；
免疫荧光实验：优先选择无荧光污染的刀片（如樱花 SAKURA 低荧光刀片），避免刀片表面残留的荧光物质干扰实验结果。
刀片清洁与更换：避免交叉污染：
每切完一个样品后，需用无尘纸蘸取无水乙醇轻轻擦拭刀片表面（从刀刃向刀背方向擦拭，避免划伤刀刃），去除残留的 OCT 包埋剂与组织碎屑，防止交叉污染；
当切片出现明显刀痕、断裂（排除组织与温度问题）时，需立即更换刀片，一般情况下，高碳钢刀片每切 50-100 张切片需更换，碳化钨刀片可切 300-500 张切片。
载玻片预处理：增强黏附性：
贴片前需将载玻片清洗干净（用洗洁精浸泡 30 分钟，超声清洗 10 分钟，蒸馏水冲洗 3 次，烘干），对易脱落的组织切片（如皮肤、脂肪），可使用多聚赖氨酸包被载玻片（樱花 SAKURA 多聚赖氨酸载玻片，货号 M100），或在载玻片表面涂抹少量 10% 明胶溶液（晾干后使用），增强切片与载玻片的结合力，避免后续染色时切片脱落。
贴片温度与时间：控制干燥速度：
贴片时将载玻片放在 37℃恒温台上（温度不宜过高，避免组织变性），用镊子轻轻夹取切片，使其平整地铺在载玻片中央，避免褶皱；
贴片后在 37℃恒温台放置 15-20 分钟（或室温放置 30 分钟），让切片自然干燥，干燥过快会导致切片收缩，干燥过慢易滋生细菌，影响染色。
HE 染色切片：固定与脱包埋剂同步：
干燥后的切片可直接放入 4% 多聚甲醛中固定 10 分钟（或放入甲醇中固定 5 分钟），固定过程中 OCT 包埋剂会被固定液溶解，无需单独脱包埋剂；
固定后用蒸馏水冲洗 3 次（每次 3 分钟），去除残留的固定液与溶解的 OCT 包埋剂，避免背景染色。
免疫荧光切片：温和脱包埋剂，保护抗原：
因 OCT 包埋剂含聚合物，需先用 PBS 冲洗切片 5 分钟（2 次），轻轻晃动容器，使包埋剂逐渐溶解；若包埋剂残留较多，可在 PBS 中加入 0.1% Triton X-100（增强渗透性），室温孵育 10 分钟，再用 PBS 冲洗干净；
脱包埋剂后需立即进行封闭（用 5% BSA 封闭 30 分钟），避免组织抗原暴露时间过长导致降解，使用樱花 SAKURA 低荧光 OCT 包埋剂时，脱包埋剂后的荧光背景可降低至 50 RFU 以下，无需额外处理。
可能原因：组织冷冻过度（温度过低）、组织未做冷冻保护（如神经组织未用蔗糖处理）、包埋剂与组织结合不紧密；
解决方法：适当升高冷冻温度（如从 - 25℃调至 - 20℃），对易脆组织进行蔗糖浸泡处理，更换樱花 SAKURA 高黏附型 OCT 包埋剂，确保组织被包埋剂包裹。
可能原因：冷冻温度过高（组织过软）、切片速度过快、刀片角度不当；
解决方法：降低冷冻温度（如从 - 18℃调至 - 22℃），减慢切片速度（从 5 mm/s 降至 2 mm/s），调整刀片角度至 15°，若仍黏连，可在刀片表面轻轻涂抹一层防黏剂（樱花 SAKURA 切片防黏剂，货号 A100）。
可能原因：使用了非低荧光 OCT 包埋剂、脱包埋剂、抗体浓度过高；
解决方法：更换樱花 SAKURA 低荧光型 OCT 包埋剂（货号 4585），延长 PBS 冲洗时间（每次 10 分钟，共 3 次），降低抗体浓度（如从 1:100 稀释至 1:200），同时在封闭液中加入 0.1% Tween-20，减少非特异性结合。
当前位置：
地址：上海市奉贤区金大公路8218号1幢
邮箱：1006909781@qq.com
传真：QQ1006909781