高通量药物筛选平台构建：BD Phosflow™ 技术助力信号通路磷酸化分析

高通量药物筛选平台构建：BD Phosflow™ 技术助力信号通路磷酸化分析

内容简介：
本文聚焦于基于流式细胞术的单细胞水平信号通路磷酸化检测技术——Phosflow™。文章详细解析了BD Phosflow™技术的核心：磷酸化特异性流式抗体、关键的固定破膜条件优化及其在多参数检测中的整合策略。探讨了该技术如何在药物筛选中实现对MAPK/ERK, JAK/STAT, AKT/mTOR等关键通路激活状态的快速、定量评估。

关键词： 磷酸化流式细胞术、信号转导、药物筛选、多参数检测、磷酸特异性抗体

正文：

细胞信号转导网络通过蛋白质的可逆磷酸化这一快速、动态的翻译后修饰来精确调控细胞的增殖、分化、存活和代谢。解码这些信号通路的异常激活是理解疾病机制（特别是癌症和自身免疫病）和开发靶向药物的核心。传统的Western Blot虽然能检测磷酸化蛋白，但其操作繁琐、通量低、且提供的是群体细胞的平均信号，掩盖了细胞异质性。

BD Phosflow™技术的出现，革命性地实现了在单细胞水平上对多重信号通路激活状态进行高通量、定量分析。它将流式细胞术的多参数优势延伸至磷酸化蛋白检测领域，为功能基因组学、药物毒理学和精准医疗提供了强大的分析工具。

Phosflow™技术的成功依赖于三个关键支柱：

1. 高特异性的磷酸化抗体：这是技术的基石。BD开发了经过严格验证的、能特异性识别特定蛋白特定磷酸化位点（如p-ERK1/2 (Thr202/Tyr204), p-AKT (Ser473), p-STAT3 (Tyr705)等）的单克隆抗体。这些抗体的开发挑战性，因为它们必须能区分磷酸化和非磷酸化的表位，且在经过后续固定破膜处理后仍能保持高亲和力和特异性。

2. 优化的固定与破膜方案：磷酸化状态瞬息万变，且磷酸化表位通常位于胞内。为了精确“捕捉"某一瞬间的磷酸化状态，并允许抗体进入，样本前处理至关重要。BD针对不同的磷酸化靶点，优化了特定的固定（如用甲醛快速“冻结"细胞状态）和破膜条件（如使用甲醇或去垢剂组合）。例如，甲醇破膜对暴露某些核内磷酸化蛋白（如STATs）的表位特别有效。这些经过预验证和优化的protocol确保了检测结果的准确性和重现性。

3. 与多色流式技术的无缝整合：这是Phosflow™。研究人员可以将磷酸化检测抗体（通常偶联于一种荧光染料）与细胞表面标志物（如CD3, CD4, CD8定义T细胞亚群）、细胞功能标志物（如CD25, CD69）甚至胞内其他蛋白的检测抗体组合使用。这样，在一次实验中，不仅可以读出某条通路是否被激活，更能精确回答是哪个细胞亚群被激活、激活的强度如何、以及多条通路之间是否存在协同或拮抗作用。例如，在评估一种激酶抑制剂时，可以同时分析它对p-S6（mTOR通路下游）、p-ERK和p-STAT5在不同免疫细胞亚群上的抑制效果，从而全面评估其效力和选择性。

在高通量药物筛选中，Phosflow™技术展现出巨大潜力。无论是筛选小分子化合物库、siRNA库还是天然产物，均可利用Phosflow™作为读数平台，快速评估候选物质对特定信号节点的调控作用。其单细胞特性尤其适用于分析混合细胞群体（如外周血单个核细胞PBMCs），无需预先分选即可直接获得不同细胞类型的反应谱，大大提高了筛选效率和信息量。

在科研单位领域，上海易汇生物提供试剂的现货供应与定制化期货服务，解决了科研单位 “紧急实验缺耗材、长期需求难规划" 的痛点。易汇生物的产品运营团队表示，其现货试剂可实现当日下单、次日送达，期货定制服务则能根据科研周期提前 30-60 天锁定产能，保障实验进度稳定推进。 对于大型药物筛选项目而言，这意味着能够确保整个筛选周期内所有核心试剂（如各种Phosflow™抗体、固定破膜试剂）的批次稳定性和持续供应，是获得可靠、可重复筛选数据的根本保障。

综上所述，BD Phosflow™技术通过将流式细胞术的高通量、多参数优势与磷酸化特异性检测的精准性相结合，为动态研究细胞信号网络提供了视角，极大地加速了靶向药物研发和转化医学研究。