细胞计数板使用后的处理非常关键

　　细胞计数板(也称血球计数板)是一种用于在显微镜下精确计算液体中细胞数量的专用玻片。它的核心作用是定量，帮你把“肉眼看不见”的细胞变成可测量的数据。

　　它长什么样?

　　它是一块比普通载玻片更厚的特制玻璃板，中间有“H”形刻痕，形成两个长方形计数平台。每个平台上都蚀刻着精密的网格，最常见的改进型纽鲍尔计数板的网格由9个大方格组成，中间那个大方格又细分为400个小方格，这是计数的核心区域。

　　主要作用

　　确定细胞浓度：最核心的用途。算出每毫升悬液中有多少细胞，这是后续细胞接种、培养等实验的基础。

　　评估细胞活力：配合台盼蓝等染料使用，死细胞会被染上颜色，活细胞则拒染。计数时分别统计，就能算出细胞存活率。

　　监测细胞生长：在不同时间点计数，可以绘制细胞生长曲线，了解细胞的增殖速度和生长状态。

　　确保实验一致性：在进行药物测试、病毒感染等需要对比的实验前，用计数板调整起始细胞数量一致，能保证实验结果的可比性。

　　如何使用与计算?

　　准备：清洁计数板和盖玻片，将特制的厚盖玻片盖在网格区域上。

　　加样：吸10微升左右混匀的细胞悬液，从盖玻片边缘的“V”形缺口注入，利用毛细作用充满计数室。

　　计数：在显微镜下，按特定规则(如数上不数下，数左不数右)统计四角和中央共5个大方格(每个包含16个小格)内的细胞数。

　　计算：根据公式算出原始悬液的细胞浓度。

　　细胞浓度 (个/毫升) = (5个方格的总细胞数 / 5) × 10⁴ × 稀释倍数

　　公式中的 10⁴ 源于计数室的高度是0.1毫米，因此一个大方格的体积正好是 0.1 µl。

　　使用注意

　　用完即清：样本会干掉，必须立刻用蒸馏水冲洗干净，然后晾干。严禁用刷子或强酸强碱清洗，以免损坏网格。

　　避免气泡：加样时不能有气泡，否则会严重影响计数准确性。

　　细胞需分散：上样前要确保细胞悬液是单个分散的，如果有成团细胞，计数结果会偏低。

　　细胞计数板使用后的处理非常关键，直接关系到仪器的寿命和下次计数的准确性。核心原则是：及时、温和、清洁，严禁刮擦网格。

　　以下是标准处理流程：

　　1. 立即清洁(样本未干时)

　　样本一旦变干，蛋白质和盐分会结晶，死死粘在网格上，极难清除，甚至可能损坏刻线。

　　吸去样本：用吸水纸轻轻接触盖玻片边缘，吸走多余的细胞悬液。

　　分离盖玻片：小心地将特制的厚盖玻片与计数板分离。

　　冲洗：用蒸馏水或去离子水(不要用自来水，其中的矿物质会留下水渍)分别冲洗计数板的两个计数平台和盖玻片。可以使用洗瓶冲洗，水流不要太猛。

　　2. 轻柔擦拭(如有必要)

　　冲洗后，如果还有残留物(如细胞碎片或少量蛋白)，可以进行擦拭。

　　正确工具：使用擦镜纸或非常柔软的棉布。

　　正确手法：将擦镜纸用水打湿，朝同一个方向(例如从左到右)轻轻擦拭网格区域，不要来回擦。用干的部分吸去水分。

　　严禁使用：任何刷子(包括软毛刷)、纸巾(木浆纤维会划伤玻璃)、手指、酒精或有机溶剂(可能会溶解网格线中的材质或留下薄膜)。

　　3. 干燥

　　清洁后，需要确保计数板和盖玻片干燥，防止水渍残留和霉菌滋生。

　　自然晾干：将计数板和盖玻片放在干净的吸水纸(如擦镜纸)上，在无尘处自然晾干。

　　加速干燥：可用洗耳球或压缩空气(确保无油)轻轻吹干。

　　注意：不要用烘箱高温烘干，可能导致玻片变形。

　　4. 检查与保存

　　干燥后，在光线下检查计数区域。如果看到网格线清晰、无斑点、无水渍，说明清洁合格。

　　保存：将清洁干燥的计数板放回专用的盒子或培养皿中，盖上盖子防尘。盖玻片单独保存。

　　下次使用前：下次使用前，只需用擦镜纸轻轻擦拭一下除尘即可，无需再次水洗。