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​质谱分析/脂质组学分析/靶标(非靶标)代谢组分析

更新时间:2024-04-22      点击次数:1321

质谱分析/脂质组学分析/靶标(非靶标)代谢组分析

质谱分析

中国生命科学实验技术服务联盟引进美国安捷伦公司的液相色谱质谱联用仪。形成了高通量、高灵敏度和高分辨率的规模化蛋白质分析支撑技术体系,为促进蛋白质组学及相关研究的发展,共享先进的技术资源,近年来生物质谱实验室蛋白质/多肽质谱鉴定、生物工程药物结构确证和蛋白质组学多项成熟的分析技术已为国内外客户提供了广泛的服务。

设备仪器:

美国安捷伦公司Agilent (xct-6330) 型号的液相色谱仪,MS为美国热电公司的TSQ型号质谱仪;质谱仪采用ESI(电喷雾电离)离子源,MS/MS 串连四极杆分析器。可在线检测极性有机化合物、核酸、多肽、小分子蛋白质及其化学修饰产品的实际分子量,并对送检样品进行分子量鉴定,纯度及修饰效果分析。

质量范围M/Z 10~2,000? 分辨率R=2M

测试范围:?

多肽、蛋白质的电喷雾质谱分子量测定以及天然产物分子、生物大分子、有机分子的质谱测试和研究

送检样品要求:样品应尽量不含盐份、离子表面活性剂、去垢剂及一些难挥发性盐。样品送检量、溶解方式以及未知可否做质谱检测的样品可与我们的工作人员联系以便提高检测效率。

(送样单请附带检测样品的品名及精确计算分子量)

送样须知:

A:样品量:50pmol干粉或1ug/uL以上(一般测试)、100pmol干粉或1ug/uL以上(MALDI串联质谱分析)、100ug干粉以上(二硫键分析、糖基化分析,磷酸化分析,其他修饰分析)、10ug干粉以上(SDS-PAGE或IEF);

B:盐含量:挥发性无机盐,<20mM,请勿使用PBS、SDS和尿素等质谱干扰物质;

C:考马斯亮蓝染色样品可全部接收,银染过程中不得使用戊二醛作为固定剂;

D:请告知样品是否有修饰,并请注明修饰方式。

主要应用 :?

*?蛋白质组学研究 *?寡聚糖和糖蛋白的研究 *?小分子化合物分析

*?药物发现和研发 *?食品和环境样品分析

检测报告:

从收到样品起1-2个工作日内可给出样品的检测报告,以电子邮件的形式发给您并附带检测结果分析。包括结果有:一级质谱:质谱图、肽段分子量、数据库检索结果;? 二级质谱:质谱图、肽段分子量、数据库检索结果、肽段氨基酸序列、修饰位点等。

脂质组学分析

对脂类的准确鉴定和绝对定量在脂质代谢的综合研究中起着重要的作用。基于稳定同位素标记内标(SIL-IS)及响应因子(RF)建立的脂质组全定量库,可对Plasmenyl-glycerophosphatidylcholine(pPC)、Lysoglycerophosphatidylcholine(LPC)和Sphinganine(Sph)等多达34类脂质进行准确定性以及绝对定量。相较于传统的脂质组学检测方法需要添加 多种SIL-IS的弊端,我们通过引入RF使得我们的脂质组全定量方法,在保持与传统方法相当定量精度以及日间重复性的基础上,可定性定量物质种类更多、通量更高。通过对我们包含76361种脂质、181300张MS/MS二级质谱图的自建脂质二级质谱库的检索匹配,我们可以仅用单个SIL-IS,对生物样本种数万种脂质同时进行准确定性以及绝对定量,且上述工作均基于计算机程序自动化运作,高效便捷。

技术优势

脂质检测效率高:可实现单一SIL-IS同时高通量定性,绝对定量上万种脂质;

专业团队检测分析:通过计算机程序自动化运行。

样本要求

植物组织? ? ? ? ? ? ? ? ? 200-500 mg

动物及临床组织标本? ? ?????200 mg

血清、血浆? ? ? ? ? ? ? ? ?200 μL

微生物、细胞? ? ? ? ? ? 1×107?cells

生物学重复

样本数量:植物和微生物n≥6,动物样本n≥10,临床样本n≥30,所有重复样本独立分析。

检测平台

UHPLC-QTOF-MS(Agilent 1290 UHPLC-AB 6600/5600 MS)

UHPLC-QE-MS(Agilent 1290 UHPLC-Thermo Q Exactive Focus/Plus/HF)

检测范围

pPC、LPC、Sph、Cer、SM、Cer-p、PhytoSph和HexCer等34类脂质

应用方向

1、通过分析各种代谢性疾病的不同代谢途径的脂质成分变化,揭示出相关疾病发生、发展过程中脂质成分的功能和影响;

2、通过比较不同处理,生物样本中脂质成分的差异,探究脂质成分的生物学功能。?

靶标代谢流分析

基于13C或者15N标记的靶标代谢流分析能够系统地定量细胞或者组织内特定代谢通路代谢网络的流量分布及各代谢途径的相对贡献,其优点是可以利用细胞内代谢物的质量同位体信息的分析方法,不但在很多情况下能够直观地表明代谢流量的整体走向,而且通过计算能够准确定量地揭示细胞内各个代谢反应的活性,以及深入理解平行反应、可逆反应等多种复杂的细胞内代谢过程,直观揭示细胞胞内的主要活性途径及各个途径的相对贡献及其分布变化特点,从而鉴定出相关疾病发生发展过程的早期诊断的标志物及其关键的主要代谢通路,并揭示其相互调控规律,为疾病发生的临床早期诊断、药物靶点治疗和预后判断提供强有力的科学依据。?

检测范围

基于13C 标记的葡萄糖(Glucose)碳代谢流分析

基于13C标记的谷氨酰胺(Glutamine)碳代谢流分析

基于15N标记的谷氨酰胺(Glutamine)氮代谢流分析

非靶标代谢流分析

经典代谢组学可以反映机体代谢物的变化及可能被激活的通路,但同一代谢物可能参与多条代谢通路而其丰度不发生变化。非靶标代谢流可以研究代谢流量随时间的动态变化规律,不限于特定的代谢通路,对流经代谢途径的代谢流量组进行定量分析,能够很好的解释代谢物在生物途径中何如变化,将代谢组学的研究提升到更高的水平和层次。代谢流分析尤其是基于13C标记的代谢流技术已成为近年来的研究热点技术之一。?

技术优势

分辨率高:可以分辨同位素标记和非标记代谢物;

与靶标代谢流相比,非靶标代谢流不限于特定的代谢通路,可对标记的代谢物进行流向分析。

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