Stressmarq SMC-401 抗体技术指南

——高特异性α-Synuclein磷酸化抗体在神经退行性疾病研究中的应用

一、产品核心特性与验证数据

1.1 抗体基本信息

靶点：α-Synuclein磷酸化位点（Ser129，pS129）

宿主/亚型：小鼠单克隆IgG1

反应物种：人、大鼠、小鼠（经质谱验证）

1.2 关键性能参数

参数 SMC-401 常规pS129抗体

特异性（WB验证） 仅识别pS129 部分交叉反应

灵敏度（IHC） 1:1000稀释可用 通常需1:500

批间差异（n=5） CV<5% CV 10-15%

1.3 应用场景推荐

最佳适用技术：

✓ 免疫组化（IHC）帕金森病脑切片

✓ 蛋白质印迹（WB）检测可溶性α-Synuclein

✓ 免疫沉淀（IP）分离病理聚集体

二、实验方案优化指南

2.1 样本前处理关键点

组织固定：

4% PFA固定≤24小时（过度固定导致表位掩蔽）

避免酸性脱钙剂（推荐EDTA脱钙）

2.2 推荐实验条件

IHC标准化流程：

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1. 抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（pH6.0，95℃ 20min）  

2. 封闭：5%驴血清 + 0.3% Triton X-100（室温1h）  

3. 一抗孵育：SMC-401 1:1000，4℃过夜  

4. 检测：HRP二抗+DAB显色（避免金属增强剂）  

WB优化方案：

凝胶条件：12% Tris-Glycine凝胶

转膜：0.2μm PVDF膜，100V 60min

封闭：5% BSA/TBST

三、数据解读与问题排查

3.1 预期结果示例

人脑Lewy小体染色：

阳性信号：棕褐色颗粒状沉积（40×可见）

背景控制：白质区域无染色

3.2 异常结果分析

现象 可能原因 解决方案

全片非特异染色 抗原修复过度 缩短修复至10min

无目标条带（WB） 磷酸酶未被抑制 添加PhosSTOP抑制剂

斑块染色不完整 组织脱水不充分 延长梯度乙醇脱水时间

四、技术问答（Q&A）

Q1：能否检测寡聚体形式？

需配合 Native-PAGE（避免SDS解聚）

Q2：与其他Synuclein抗体的区别？

SMC-401特异性：

✓ 不识别非磷酸化α-Synuclein

✓ 与β/γ-Synuclein无交叉

文档增强建议：

插入 【Lewy小体染色示例图】 标注典型病理特征

添加 磷酸化验证方案（Lambda磷酸酶处理对照）

关键步骤标注 ⚠️警示（如"避免使用酸性脱钙液"）