Illumina MS-102-3003（MiSeq Reagent Kit v3）基因测序试剂盒用户指南

一、产品概述

Illumina MS-102-3003（MiSeq Reagent Kit v3） 是专为Illumina MiSeq测序平台设计的高性能测序试剂盒，采用边合成边测序（Sequencing-by-Synthesis, SBS）技术，支持长达600个循环的测序反应，单次运行可生成高达15 Gb的数据输出，适用于全基因组重测序、转录组分析、宏基因组学及靶向测序等应用场景。

二、核心性能参数

• 测序循环数：600次（支持150次循环格式用于计数应用）

• 数据输出：最大15 Gb（600循环）或3.8 Gb（150循环）

• 读长：双端测序（Paired-End）支持2×300 bp

• 读数数量：单次运行最多可生成2500万条序列

• 系统兼容性：适用于研究模式下的MiSeqDx、MiSeq FGx及标准MiSeq系统

三、技术原理

SBS技术通过以下步骤实现测序：

1. 碱基延伸：DNA聚合酶催化dNTP（脱氧核苷酸）与模板链互补配对。

2. 荧光激发与信号收集：每个dNTP携带可逆终止基团及荧光标记，经激光激发后发射特定波长荧光，信号由光学系统捕捉。

3. 终止基团切除：荧光信号收集后，化学试剂切除终止基团，恢复链延伸能力。

4. 循环重复：上述步骤循环进行，直至完成测序长度。

试剂盒改进：

• 优化化学配方提升簇密度和片段长度，Q30得分（质量值≥30的碱基比例）显著提高。

• 即用型预装试剂盒设计，减少人为操作误差。

四、操作流程

1. 文库制备

• 使用文库构建试剂（如TruePrep RNA Library Prep Kit for Illumina）生成测序文库。

• 通过Qubit定量仪确定文库浓度，稀释至4 nM后用NaOH变性。

2. 试剂盒准备

• 从-20℃冰箱取出试剂盒，室温解冻后颠倒混匀。

• 准备冰水混合物（冰:水=3:1）预冷杂交缓冲液（HT1）。

3. 上机前处理

• 将变性文库与预冷HT1混合，稀释至20 pM终浓度。

• 添加PhiX质控DNA（5%比例）以监控测序质量。

4. 测序运行

• 创建Sample Sheet文件，定义样本信息及运行参数。

• 启动MiSeq测序仪，选择“Sequence"模式并加载试剂盒。

• 建议初始上机浓度为4 pM，后续可根据结果调整至8 pM。

五、应用场景与优势

• 全基因组重测序：适用于人类、动植物及微生物基因组的变异检测。

• 转录组分析：定量基因表达水平，解析基因调控网络。

• 宏基因组学：分析环境样本中的微生物群落多样性。

• 靶向测序：聚焦特定基因或区域，支持精准医疗研究。

优势：

• 高通量：单次运行生成15 Gb数据，支持大规模基因组研究。

• 长读长：2×300 bp读长提升复杂基因组区域解析能力。

• 高质量：改进试剂配方提升测序准确性（Q30得分）。

• 兼容性强：适配多种MiSeq测序系统，研究模式灵活。

六、注意事项

1. 试剂储存：试剂盒需在-20℃保存，解冻后避免反复冻融。

2. 文库质量：确保文库片段分布均匀，避免小片段（<100 bp）过量导致测序失败。

3. 上机浓度：初始建议使用4 pM，过高浓度可能导致簇密度过高而信号饱和。

4. 设备维护：测序前需检查仪器状态，避免因硬件故障导致数据丢失。

七、数据解读

• 质量值（Q值）：Q30得分反映碱基识别准确性，≥80%为合格标准。

• 覆盖度：目标区域测序深度需≥30×以确保变异检测可靠性。

• 生物信息学分析：推荐使用Illumina BaseSpace平台或第三方工具（如BWA、GATK）进行数据处理。

八、供货信息与支持

• 产品货号：MS-102-3003

• 供应商：Illumina授权代理商（如华雅思创生物科技有限公司）

• 技术支持：联系供应商获取实验设计、数据分析及仪器维护咨询。

通过本指南，科研人员可快速掌握Illumina MS-102-3003试剂盒的使用方法，为基因组学研究提供高效、准确的测序解决方案。如需进一步技术文档或培训，请访问Illumina网站或联系当地代理商。