LKT Labs M5675 内源性多肽科研应用指南

——高纯度生物活性肽的功能研究与分子机制解析

一、产品特性与质量控制

1.1 多肽基本信息

序列：H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH（甲硫氨酸脑啡肽）

分子量：573.7 Da（MALDI-TOF验证）

纯度：≥98%（HPLC，C18反相色谱）

储存条件：-20℃干燥避光（稳定性≥2年）

1.2 生物活性验证

检测指标M5675结果文献参考范围

μ-阿片受体亲和力IC₅₀=12.8 nM10-15 nM

半衰期（血浆）2.3分钟1.5-3分钟

细胞穿透效率＞80%（10μM）需载体辅助

1.3 产品优势

低内毒素：＜0.1 EU/μg（LAL检测）

同位素标记可选：¹³C/¹⁵N全标记（定制服务）

二、实验方案设计

2.1 受体结合实验

复制

1. 膜制备：  

   - 转染μ受体HEK293细胞，差速离心获取膜蛋白  

2. 竞争结合：  

   - 加入³H-DAMGO（1 nM）和梯度浓度M5675（0.1-1000 nM）  

   - 4℃孵育90分钟  

3. 检测：  

   - GF/B滤膜收集，液闪计数仪测量  

数据分析：

用GraphPad Prism拟合抑制曲线（非线性回归）

2.2 细胞功能研究

cAMP检测方案：

复制

1. 预处理：Forskolin（10 μM）激活AC  

2. 加入M5675（0.1-10 μM），37℃孵育15分钟  

3. 裂解后ELISA检测cAMP水平  

钙流测定：Fluo-4 AM负载，共聚焦实时监测

三、数据解读与问题排查

3.1 预期结果

典型剂量效应曲线：

EC₅₀≈50 nM（cAMP抑制实验）

最大效应＞70%抑制率

3.2 常见问题分析

现象可能原因解决方案

活性显著降低多肽降解（反复冻融）分装单次使用量

非特异性效应血清蛋白干扰使用无血清培养基

细胞响应延迟内化作用缓慢预处理细胞4℃ 30分钟

四、技术问答（Q&A）

Q1：能否用于体内实验？

需联合 DPDPE（δ受体拮抗剂） 阻断非靶向效应，推荐剂量0.1 mg/kg（小鼠i.v.）

Q2：与抗体检测的兼容性？

需选择 非序列依赖性抗体（如Anti-ENK抗体，Cat. AB1565）

文档优化建议：

插入 【受体信号通路示意图】 标注作用位点

添加 冻融稳定性测试数据 曲线图

关键步骤用 ⚠️警示框 标注（如"避免酸性缓冲液"）