Fastin™ Elastin Assay (Biocolor F2000) 弹性蛋白检测技术指南

——精准定量组织与细胞外基质中弹性蛋白的黄金标准

一、检测原理与产品优势

1.1 特异性结合机制

五肽重复序列靶向：

染料特异性结合弹性蛋白特征性 GXXPG 结构域（X为疏水氨基酸）

不识别胶原或纤维连接蛋白（交叉反应＜0.1%）

比色法检测：

形成紫红色复合物（λmax=513nm），动态范围 0.2-50 μg

1.2 性能参数对比

参数Fastin™ F2000传统ELISA法组织化学染色

检测时间1.5小时4-6小时定性分析

灵敏度0.1 μg1 μgN/A

样本需求量10 mg组织50 mg组织5 μm切片

数据输出定量（μg/mg）半定量图像分析

1.3 适用样本类型

推荐样本：

✓ 皮肤/血管/肺组织匀浆

✓ 细胞外基质（ECM）提取物

✓ 疾病模型（如动脉粥样硬化斑块）

二、标准化实验流程

2.1 样本前处理

组织裂解方案：

复制

1. 液氮研磨至粉末状

2. 加入0.25M草酸铵（试剂盒提供），95℃加热2小时

3. 12,000g离心10分钟，取上清检测

细胞ECM提取：

用含 10mM EDTA 的PBS轻柔刮取培养皿底层

2.2 检测步骤

复制

1. 标准品制备：0, 2, 5, 10, 20, 50 μg/mL梯度

2. 样本/标准品各100 μL + 染料试剂50 μL

3. 37℃振荡孵育90分钟（避光）

4. 离心沉淀复合物，去上清

5. 染料释放剂500 μL重悬，测OD513nm

三、数据解读与优化

3.1 标准曲线示例

弹性蛋白(μg)OD513nm（均值）

00.012

50.305

100.642

201.218

拟合方程：y=0.061x + 0.015（R²=0.998）

3.2 质量控标准

空白值：OD513nm＜0.05

重复性：批内CV＜8%（n=3）

3.3 问题排查指南

现象可能原因优化方案

标准曲线线性差染料未充分溶解37℃预热试剂10分钟

样本值超出范围延长加热至3小时

背景值高增加离心至15,000g

四、技术问答（Q&A）

Q1：能否检测弹性蛋白降解产物？

需改用 Fastin™ Elastin Degradation Kit（Cat. F2200）检测可溶性片段

Q2：与天狼星红染色的相关性？

定量结果与 Verhoeff染色 显著相关（r=0.91, p＜0.001），但与天狼星红无直接可比性