QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)用户指南

摘要：本文为科研人员提供QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)的详细用户指南。介绍了该产品的基本信息、原理、应用场景、操作步骤、注意事项及性能参数，旨在帮助用户更好地理解和使用该产品，以提升实验效率与准确性。
关键词：QIAGEN 19133蛋白酶K；DNA和RNA制备；蛋白酶消化；用户指南

一、引言

在分子生物学实验中，DNA和RNA的制备是至关重要的步骤。蛋白酶K作为一种高效的蛋白酶，在DNA和RNA制备过程中的蛋白酶消化步骤中发挥着关键作用。QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)凭借其高活性、广泛的底物特异性和稳定的性能，本文将详细介绍该产品的相关信息，以帮助用户更好地使用。

二、产品概述

（一）基本信息

• 品牌：QIAGEN

• 产品名称：蛋白酶K（Proteinase K）

• 货号：19133

• 规格：10ml

• 存储条件：2—8℃

（二）产品原理

QIAGEN蛋白酶K是一种从腐生真菌Tritirachium album中分离出来的枯草杆菌蛋白酶型蛋白酶。它具有很高的比活性，能在很宽的温度（通常在37—70℃范围内活性较高）和pH值（pH 4.0—12.0，最佳pH为7.5—9.0）范围内保持稳定，且在较高温度下活性大大提高。可溶性钙对于其酶活性不是必需的，这意味着用于抑制Mg²⁺依赖性酶（如核酸酶）的EDTA不会抑制蛋白酶K的活性。

三、产品特点

（一）高活性

在多种DNA和RNA纯化流程常用的缓冲液中提供高活性，如30 mM Tris·Cl、30 mM EDTA、5% Tween 20、0.5% Triton X-100、800 mM GuHCl等缓冲液中，都能保持较高的活性。

（二）广泛的底物特异性

适用于多种样本的蛋白酶消化，包括血液、细胞培养基、组织、细菌等，能够高效地消化样本中的蛋白质，为后续的DNA和RNA提取创造有利条件。

（三）稳定性好

在很宽的温度和pH值范围内可保持稳定，并且在高温时具有更高活性，这使得它能够适应不同的实验条件和样本类型。

（四）不含DNase和RNase活性

避免了在消化过程中对DNA和RNA的降解，保证了后续提取的核酸的质量。

四、应用场景

（一）DNA提取

在从血液、细胞培养基和组织中纯化DNA的过程中，蛋白酶K能够有效地消化样本中的蛋白质，使DNA得以释放和纯化。例如，在QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2（30 mM Tris·Cl；30 mM EDTA；5% Tween 20；0.5% Triton X-100；800 mM GuHCl）中，蛋白酶K表现出较高的活性，有助于从复杂样本中高效提取DNA。

（二）RNA提取

在RNA提取过程中，蛋白酶K同样能够消化蛋白质，减少RNA的降解，提高RNA的纯度和产量。

（三）其他应用

除了DNA和RNA提取，蛋白酶K还可用于其他需要蛋白酶消化的实验，如蛋白质组学研究中的样品处理等。

五、操作步骤

（一）配制蛋白酶K溶液

一般配制浓度为20mg/ml蛋白酶K溶液。例如，可将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K溶解。不要涡旋混合，再加水定容到10ml，最后分装成小份贮存于-20℃。

（三）使用方法

1. 根据终浓度50—100μg/ml，吸取适量蛋白酶K溶液，滴到消化样品中。

2. 孵育：孵育温度为55—65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15min至48h，依据样本情况而定。

3. 后续处理：孵育完成后，按照相应的DNA或RNA提取试剂盒的操作步骤进行后续处理。

六、注意事项

（一）操作防护

本产品对人体有害，操作时请务必穿实验服，戴一次性手套和口罩，避免直接接触人体或吸入体内。

（二）稀释建议

如果需把20mg/ml的蛋白酶K再稀释，建议使用pH7.4—7.8的10mM Tris-HCl进行稀释。

（三）避免同时使用

使用手动QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用户应该用7ml蒸馏水重悬每个瓶中的QIAGEN Protease。使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用户应该用10ml蒸馏水重悬每个瓶中的QIAGEN Protease。QIAGEN蛋白酶不可与DNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL缓冲液同时使用。

（四）特殊条件下的注意事项

在SDS浓度大于0.5%、肌氨酰浓度大于1%、或有高浓度的其他去污剂时，EDTA的浓度必须小于8mM，这样才能在延长的孵育时间内达到安全活性。

（五）储存条件

启用后如需反复使用，应置于-20℃—-80℃冰箱冷冻保存，或配制成溶液后过滤除菌并分装保存。

七、性能参数

（一）活性

600mAU/ml（在规定条件下，每分钟释放1μmol酪氨酸所需酶量为1个活性单位）。

（二）纯度

Native PAGE电泳检测纯度≥95%。

（三）比活性

比活性值≥30U/mg蛋白。

（四）稳定性

在尿素和SDS中活性稳定，在pH4.0—12.0范围内均有活性，最佳pH为7.5—9.0。

八、结论

QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)是一种高效、稳定的蛋白酶，适用于DNA和RNA制备过程中的蛋白酶消化。通过遵循本用户指南中的操作步骤和注意事项，科研人员可以更好地利用该产品，提高实验效率和准确性。