Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay用户指南

摘要

本文旨在为科研人员提供Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay的详细用户指南。该产品是一种用于测量细胞中环二鸟苷酸（c-di-GMP）水平的均质荧光测定试剂，具有高选择性、高灵敏度和操作简便等优点。本文将介绍产品的原理、特点、应用场景、操作步骤、注意事项及性能参数，帮助用户更好地理解和使用该产品。

关键词：环二鸟苷酸（c-di-GMP）；均质荧光测定；Lucerna Technologies 200-100；用户指南

一、引言

环二鸟苷酸（c-di-GMP）是细菌所有的一类核酸类第二信使，参与并调节细菌多种生理功能，包括细胞分化、生物被膜的形成以及致病因子的产生等。因此，准确测量细胞内c-di-GMP水平对于研究细菌生理活动及开发新型抗菌药物具有重要意义。Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay作为一种新型的均质荧光测定试剂，为科研人员提供了便捷、高效的c-di-GMP检测手段。

二、产品原理

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay基于荧光适体（Spinach™）技术，通过c-di-GMP与传感器中c-di-GMP核糖开关的初始结合，导致Spinach™适体的稳定，进而结合DFHBI-1T以产生荧光。荧光信号的强度与c-di-GMP的浓度成正比，通过测量荧光强度即可确定细胞内c-di-GMP的水平。

三、产品特点

1. 高选择性：该试剂对c-di-GMP具有高度选择性，不受常见反配体的干扰。即使与过量500—1000倍的反配体（如GMP、pGpG和c-AMP-GMP）相比，也能实现出色的检测性能。

2. 高灵敏度：该试剂的检测限为50nM，具有宽广的动态范围，能够准确测量低浓度的c-di-GMP。

3. 操作简便：只需将样品与提供的检测试剂一起孵育30分钟，然后在带有FITC/GFP滤光片或激发波长482nm和发射波长505nm的荧光读板机上读取样品即可。

4. 均质测定：无需造粒、裂解或洗涤步骤，可直接在均质溶液中进行测量，简化了实验流程。

四、应用场景

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay适用于多种应用场景，包括但不限于：

1. 细菌生理研究：用于研究c-di-GMP在细菌细胞分化、生物被膜形成及致病因子的产生等生理过程中的作用。

2. 抗菌药物研发：通过测量抗菌药物处理前后细菌细胞内c-di-GMP水平的变化，评估药物的疗效及作用机制。

3. 环境监测：用于检测环境样品中细菌的c-di-GMP水平，评估环境污染程度及细菌污染状况。

五、操作步骤

1. 样品准备：收集待测细菌细胞，用适当的缓冲液悬浮细胞，调整细胞密度至适宜范围。

2. 试剂添加：向样品中加入提供的检测试剂，包括c-di-GMP传感器和荧光团DFHBI-1T。

3. 孵育：将样品与试剂混合均匀后，在37℃下孵育30分钟。

4. 荧光测量：将孵育后的样品转移至荧光读板机中，使用FITC/GFP滤光片或激发波长482nm和发射波长505nm进行荧光测量。

5. 数据分析：根据荧光强度与c-di-GMP浓度的标准曲线，计算样品中c-di-GMP的浓度。

六、注意事项

1. 试剂保存：试剂应保存在-20℃下，避免反复冻融。使用前应将试剂平衡至室温，并充分混匀。

2. 样品处理：样品处理过程中应避免污染，确保样品的纯净度。同时，应注意样品的细胞密度，避免过高或过低的细胞密度影响测量结果。

3. 仪器校准：在使用荧光读板机进行测量前，应对仪器进行校准，确保测量结果的准确性。

4. 实验重复性：为了提高实验结果的可靠性，建议进行多次重复实验，并取平均值作为最终结果。

七、性能参数

1. 检测限：50nM

2. 线性范围：0.5—400nM

3. 灵敏度：比适配体（500pM）的灵敏度高约1个数量级

4. 特异性：对c-di-GMP具有高度选择性，不受常见反配体的干扰

5. 动态范围：宽广的动态范围，能够准确测量不同浓度的c-di-GMP

八、结论

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay作为一种新型的均质荧光测定试剂，为科研人员提供了便捷、高效的c-di-GMP检测手段。该试剂具有高选择性、高灵敏度和操作简便等优点，适用于多种应用场景。通过遵循本用户指南中的操作步骤和注意事项，科研人员可以准确测量细胞内c-di-GMP水平，为细菌生理研究及抗菌药物研发提供有力支持。