Illumina MS-102-2003 基因测序试剂用户指南

Illumina MS-102-2003 基因测序试剂用户指南

——高效、精准的下一代测序解决方案

一、产品概述

Illumina MS-102-2003 MiSeq Reagent Kit v2（500 cycles）（货号：MS-102-2003）是一款专为Illumina MiSeq测序平台设计的高通量基因测序试剂盒，采用边合成边测序（SBS）技术，支持长达500个循环的测序反应，单次运行可生成高达8.5 Gb的数据输出，适用于全基因组重测序、转录组分析、宏基因组学及靶向测序等应用场景。

核心参数：

• 规格：500 cycles

• 数据输出：8.5 Gb（500 cycles）、5.1 Gb（300 cycles）、1.2 Gb（300 cycles Micro Kit）、0.850 Gb（50 cycles）

• 读长：双端测序（Paired-End）支持2×250 bp（标准配置），最长可扩展至2×300 bp

• 试剂类型：簇生成、双端测序、边合成边测序

• 系统兼容性：研究模式下的MiSeqDx、MiSeq FGx及标准MiSeq系统

• 储存条件：-20℃避光保存，解冻后避免反复冻融

二、技术优势

1. 高通量与长读长

• 双表面成像技术：与v1试剂盒相比，双表面成像使每个流动槽的通量翻倍，片段数增加2倍。

• 长读长支持：500 cycles试剂盒可扩展片段长度，适用于复杂基因组区域解析（如结构变异检测）。

2. 高效化学过程

• 改良的簇密度：通过优化化学配方，簇密度提升30%，减少循环时间。

• 高质量测序：Q30得分（质量值≥30的碱基比例）≥80%，确保碱基识别准确性。

3. 灵活配置

• 多规格选择：提供50、300、500 cycles三种循环数规格，满足不同实验需求。

• Micro/Nano规格：适用于低通量应用（如Micro Kit：1.2 Gb/300 cycles；Nano Kit：0.5 Gb/500 cycles）。

4. 智能交互与兼容性

• RFID编码：所有组件均采用RFID编码，与MiSeq系统智能交互，验证兼容性并减少操作误差。

• 广泛适配：兼容研究模式下的多种MiSeq系统，支持Illumina Advantage大规模测序产品（如特定批次出货、延长保质期）。

三、操作指南

（一）实验前准备

1. 试剂与耗材

• Illumina MS-102-2003 MiSeq Reagent Kit v2（500 cycles）

• MiSeq测序仪及配套流动槽

• 文库构建试剂（如TruePrep RNA Library Prep Kit for Illumina）

• Qubit定量仪、NaOH变性试剂、冰水混合物（冰:水=3:1）

2. 文库准备

• 使用文库构建试剂生成测序文库，并通过Qubit定量仪确定浓度。

• 将文库稀释至4 nM，用NaOH变性后，与预冷的杂交缓冲液（HT1）混合至20 pM终浓度。

• 添加5%比例的PhiX质控DNA以监控测序质量。

（二）实验操作

1. 试剂盒准备

• 从-20℃冰箱取出试剂盒，室温解冻后颠倒混匀。

• 准备冰水混合物预冷杂交缓冲液（HT1）。

2. 上机操作

• 启动MiSeq测序仪，选择“Sequence"模式并加载试剂盒。

• 创建Sample Sheet文件，定义样本信息及运行参数（如读长、循环数）。

• 建议初始上机浓度为4 pM，后续可根据结果调整至8 pM。

3. 测序运行

• 单次运行时间：约27-48小时（具体时间取决于读长和循环数）。

• 运行结束后，系统自动生成FASTQ格式数据文件。

（三）实验后处理

• 数据分析：推荐使用Illumina BaseSpace平台或第三方工具（如BWA、GATK）进行数据处理。

• 试剂盒储存：未使用的试剂需重新密封，-20℃保存。

• 废弃物处理：按实验室生物安全规范处理。

四、使用技巧与高效操作

1. 优化文库质量

• 确保文库片段分布均匀，避免小片段（<100 bp）过量导致测序失败。

• 使用Agilent Bioanalyzer或TapeStation验证文库质量。

2. 提高测序通量

• 结合双表面成像技术，选择500 cycles试剂盒以每个流动槽的通量。

• 对于低通量需求，可选择Micro或Nano规格试剂盒。

3. 质量控制

• 运行前检查仪器状态，避免硬件故障导致数据丢失。

• 监控Q30得分和覆盖度（目标区域测序深度需≥30×）。

五、注意事项

1. 安全规范

• 操作时佩戴手套与护目镜，避免试剂接触皮肤或吸入。

• 废弃物需按化学危险品处理。

2. 操作细节

• 移液精度：使用校准后的移液器，误差<±1%。

• 温度控制：确保试剂和文库在规定温度下储存和处理。

3. 故障排除

• 簇密度过高：降低上机浓度至4 pM以下。

• 信号饱和：检查文库浓度和流动槽状态。

六、用户评价与支持

• 用户反馈：

• “MS-102-2003试剂盒显著提高了测序通量，双表面成像技术使数据输出翻倍。"

• “Q30得分稳定在85%以上，适用于高精度变异检测。"