AAT CCK-8试剂盒用户指南——精准评估细胞增殖与活性的技术利器

AAT CCK-8试剂盒用户指南——精准评估细胞增殖与活性的技术利器

——助力药物筛选、肿瘤研究及细胞毒性分析

一、产品概述

AAT CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）是一款基于WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的细胞活性检测试剂，专为科研人员设计，用于快速、灵敏地评估细胞增殖、毒性及药物敏感性。该试剂盒通过检测细胞线粒体脱氢酶活性，将WST-8还原为橙黄色甲臜（Formazan），其吸光度值（OD值）与活细胞数量成正比，广泛应用于药物筛选、肿瘤研究、细胞毒性分析及生物因子活性检测等领域。

核心参数：

• 货号：AAT-CCK8-XX（具体货号以实际产品为准）

• 规格：100次检测/盒（含WST-8溶液、稀释缓冲液）

• 检测波长：450 nm

• 灵敏度：可检测100个活细胞/孔

• 适用细胞类型：贴壁细胞、悬浮细胞、原代细胞及细胞系

二、技术优势

1. 高灵敏度与特异性

• 灵敏度：可检测低至0.1%的细胞增殖变化，优于传统MTT法。

• 特异性：仅对活细胞脱氢酶活性响应，不受死细胞或非细胞成分干扰。

2. 操作简便与高效

• 流程简化：无需洗涤、离心或有机溶剂提取，直接向培养板中加入CCK-8试剂即可。

• 时间节省：孵育时间仅需1-4小时，显著缩短实验周期。

3. 多场景应用

• 药物筛选：快速评估候选药物的细胞毒性及抗增殖效果。

• 肿瘤研究：检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性及耐药性。

• 细胞毒性分析：评估环境污染物、化学物质或纳米材料对细胞的毒性作用。

4. 高兼容性

• 培养基兼容性：适用于含酚红、血清或抗生素的培养基。

• 仪器兼容性：适用于酶标仪、多功能微孔板检测仪等。

三、操作指南

（一）实验前准备

1. 试剂与耗材

• AAT CCK-8试剂盒（含WST-8溶液、稀释缓冲液）

• 96孔或384孔细胞培养板

• 酶标仪（配备450 nm滤光片）

• 细胞培养基、PBS、胰蛋白酶等

2. 细胞准备

• 细胞接种：将细胞按5,000-10,000个/孔接种于96孔板中，每孔100 μL培养基。

• 预培养：37℃、5% CO₂条件下培养24小时，使细胞贴壁。

（二）实验操作

1. 药物处理（如需）

• 加入不同浓度的待测药物，继续培养24-72小时。

2. CCK-8试剂添加

• 每孔加入10 μL CCK-8试剂（避免产生气泡）。

• 轻轻摇匀培养板，37℃孵育1-4小时（孵育时间根据细胞类型调整）。

3. 吸光度检测

• 使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔OD值。

• 数据记录：记录实验孔（含细胞、培养基、CCK-8及药物）、对照孔（含细胞、培养基、CCK-8）及空白孔（仅含培养基、CCK-8）的OD值。

（三）数据分析

1. 细胞活性计算

• 细胞存活率 = (实验孔OD值 - 空白孔OD值) / (对照孔OD值 - 空白孔OD值) × 100%

• 细胞抑制率 = 1 - 细胞存活率

2. IC₅₀值计算

• 使用GraphPad Prism或SPSS软件绘制药物浓度-抑制率曲线，计算半数抑制浓度（IC₅₀）。

四、使用技巧与高效操作

1. 样本优化

• 细胞密度：避免细胞过密导致接触抑制，建议每孔细胞数不超过10,000个。

• 孵育时间：白细胞或悬浮细胞需延长孵育时间至4小时，或增加细胞数量。

2. 试剂保存

• CCK-8试剂需避光保存于4℃，开封后建议2个月内使用。

3. 实验对照

• 空白对照：仅含培养基和CCK-8试剂，用于扣除背景信号。

• 对照孔：含细胞、培养基和CCK-8试剂，用于标准化OD值。

4. 干扰因素排除

• 酚红影响：酚红培养基不影响检测结果，无需额外处理。

• 药物干扰：若药物本身在450 nm处有吸收，需更换培养基后重新检测。

五、注意事项

1. 安全规范

• 操作时佩戴手套与口罩，避免试剂接触皮肤或吸入。

• 废弃物需按生物安全等级处理。

2. 操作细节

• 移液精度：使用校准后的移液器，误差<±1%。

• 孵育温度：严格控制在37℃，避免温度波动影响结果。

3. 故障排除

• OD值偏低：检查细胞状态、CCK-8试剂是否失效或孵育时间不足。

• 背景信号高：确保空白孔无细胞污染，或缩短孵育时间