MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 用户指南

MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 用户指南

——精准识别猪B细胞亚群，助力免疫学与动物疾病模型研究

一、产品概述

MCA6099GA AbD Serotec MOUSE ANTI PIG B CELL SUBSET 是AbD Serotec公司（现隶属于MorphoSys集团）研发的单克隆抗体，专为识别猪B细胞亚群设计。该抗体通过小鼠杂交瘤技术制备，具备高特异性、高亲和力及低背景信号的特点，适用于流式细胞术（FCM）、免疫组织化学（IHC）、免疫荧光（IF）及Western Blot（WB）等实验。

核心参数：

• 货号：MCA6099GA

• 规格：0.1 mg/支（可满足100次流式实验或20次WB实验）

• 保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融

• 有效期：24个月（未开封）

• 应用领域：猪免疫学、异种移植研究、猪病模型开发等

二、技术优势

1. 高特异性

• 免疫原：重组猪B细胞表面抗原，确保抗体对目标B细胞亚群的精准识别。

• 交叉反应性：经ELISA与WB验证，与猪B细胞特异性结合，不与T细胞、NK细胞等其他免疫细胞交叉反应。

2. 多应用兼容性

• 流式细胞术：推荐稀释比例1:50-1:200，可检测外周血单个核细胞（PBMC）中B细胞比例。

• 免疫组织化学：适用于石蜡切片与冷冻切片，推荐稀释比例1:100-1:500。

• 免疫荧光：可与Alexa Fluor® 488、FITC等荧光标记物偶联，实现多色荧光标记。

• Western Blot：检测灵敏度达1 ng，适用于猪组织裂解液或细胞裂解液中的B细胞相关蛋白检测。

3. 质量验证

• 纯度：通过SDS-PAGE验证，纯度≥95%。

• 内毒素含量：<0.1 EU/μg，符合无菌实验要求。

三、操作指南

（一）实验前准备

1. 试剂与耗材

• MCA6099GA抗体（货号MCA6099GA）

• 荧光标记二抗（如Goat Anti-Mouse IgG Alexa Fluor® 488）

• 封闭液（5% BSA或10%山羊血清）

• 洗涤液（PBS + 0.1% Tween-20）

2. 仪器设置

• 流式细胞仪：设置FL1通道（激发波长488 nm，发射波长525 nm）。

• 共聚焦显微镜：选择488 nm激光器，配备530/30 nm滤光片。

（二）实验操作

1. 流式细胞术

• 样本处理：收集猪PBMC，用PBS洗涤后重悬于100 μL FACS缓冲液中。

• 抗体孵育：加入1 μL MCA6099GA抗体（1:100稀释），4℃避光孵育30分钟。

• 洗涤：加入2 mL FACS缓冲液，300 × g离心5分钟，重复2次。

• 二抗孵育：加入1 μL Alexa Fluor® 488标记二抗（1:500稀释），4℃避光孵育30分钟。

• 检测：重悬于500 μL FACS缓冲液中，上机检测。

2. 免疫组织化学

• 切片制备：取猪脾脏组织，经4%多聚甲醛固定后，石蜡包埋切片（厚度5 μm）。

• 抗原修复：将切片置于柠檬酸缓冲液（pH 6.0）中，微波加热10分钟。

• 封闭：滴加5% BSA，37℃孵育30分钟。

• 一抗孵育：滴加MCA6099GA抗体（1:200稀释），4℃过夜。

• 显色：加入HRP标记二抗，DAB显色后苏木素复染。

3. Western Blot

• 电泳：取猪脾脏组织裂解液（20 μg总蛋白），经10% SDS-PAGE分离。

• 转膜：将蛋白转移至PVDF膜，300 mA恒流转印90分钟。

• 封闭：5%脱脂奶粉封闭1小时。

• 一抗孵育：MCA6099GA抗体（1:1000稀释），4℃孵育过夜。

• 显色：加入HRP标记二抗，ECL化学发光显影。

（三）数据分析

1. 流式细胞术

• 使用FlowJo软件分析B细胞比例，设置CD3⁻门控后统计B细胞阳性细胞。

2. 免疫组织化学

• 使用Image J软件定量分析B细胞密度，计算每平方毫米内的阳性细胞数。

3. Western Blot

• 使用Bio-Rad Image Lab软件分析条带灰度值，与内参（如β-actin）比值确定蛋白表达量。

四、使用技巧与高效操作

1. 样本保存

• 猪组织样本建议液氮速冻后保存于-80℃，避免反复冻融。

• PBMC样本需在采集后4小时内处理，或保存于液氮中。

2. 抗体稀释

• 使用抗体稀释液（含1% BSA的PBS）进行稀释，避免使用含NaN₃的缓冲液。

• 未用完的稀释抗体可分装后保存于-20℃，避免反复冻融。

3. 实验优化

• 流式细胞术：若背景信号高，可增加FACS缓冲液中BSA浓度至5%。

• 免疫组织化学：若显色不均，可延长抗原修复时间至15分钟。

五、注意事项

1. 安全规范

• 操作时佩戴手套与口罩，避免抗体污染。

• 废弃物需按生物安全等级处理。

2. 操作细节

• 移液精度：使用校准后的移液器，误差<±1%。

• 孵育温度：一抗与二抗孵育需在4℃或室温下进行，避免37℃高温导致非特异性结合。

3. 故障排除

• 无信号：检查抗体是否失效（可通过WB检测抗体质量），或样本是否正确处理。

• 高背景：增加封闭时间或降低抗体浓度。

六、用户评价与支持

• 用户反馈：

• “MCA6099GA抗体在猪B细胞检测中表现出的特异性，背景信号极低。"

• “适用于多种实验平台，显著提高了实验效率。"