Eaivelly 人细胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用户指南

Eaivelly 人细胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用户指南

——精准定量细胞凋亡抑制因子的科研利器

一、产品概述

Eaivelly 人细胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 是基于双抗体夹心法（Sandwich ELISA）的定量检测试剂盒，专为科研单位设计，用于 人血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液及尿液 中细胞凋亡抑制因子（IAP）的精准定量分析。该试剂盒通过 高效、灵敏、特异的抗体 结合酶联反应，生成与目标蛋白浓度成正比的颜色信号，支持 0.2 IU/L 至 6 IU/L 的检测范围，灵敏度达 3 pg/mL（具体批次可能略有差异）。

二、核心组件与参数

三、技术优势

1. 高效灵敏

• 采用 高效价、高特异性抗体，检测限低至 3 pg/mL，确保低丰度蛋白的精准捕获。

• 重复性 CV% < 9%（批内） 和 < 11%（批间），保证实验结果稳定性。

2. 广泛适用性

• 支持多种样本类型，包括 血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液及尿液，满足不同研究需求。

• 吸附性能优异，固相载体空白值低，孔底透明度高，确保显色均匀。

3. 节省成本

• 预包被板设计减少人工包被步骤，降低操作难度与试剂消耗。

• 试剂盒提供 48 孔或 96 孔 两种规格，适配不同实验规模。

四、操作流程

（一）样本准备

1. 血清/血浆

• 室温静置 10-20 分钟使血液自然凝固，2000-3000 rpm 离心 20 分钟，取上清。

• 如需长期保存，分装后置于 -20℃ 或 -70℃，避免反复冻融。

2. 组织匀浆液

• 切割组织后，按 1:10（w/v） 加入 PBS（pH 7.4），匀浆后 2000-3000 rpm 离心 20 分钟，取上清。

3. 细胞培养上清液

• 直接收集上清，2000-3000 rpm 离心 20 分钟，去除细胞碎片。

（二）标准曲线构建

1. 将标准品复溶后，用标准品稀释液进行 2 倍梯度稀释，得到 1800、1200、600、300、150 ng/L 的浓度梯度。

2. 在酶标包被板上设置 10 个标准孔，每孔加入 50 μL 稀释后的标准品。

（三）加样与孵育

1. 在待测样品孔中加入 40 μL 样品稀释液 和 10 μL 样本（稀释 5 倍）。

2. 每孔加入 50 μL 酶标试剂，空白孔仅加稀释液与酶标试剂。

3. 用封板膜密封后，37℃ 孵育 30 分钟。

（四）洗涤与显色

1. 弃去液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复 5 次。

2. 每孔加入 50 μL 显色剂 A 和 B，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色 15 分钟。

3. 每孔加入 50 μL 终止液，立即在 450 nm 波长 下测定 OD 值。

（五）结果计算

1. 以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 根据样品 OD 值，通过标准曲线计算实际浓度，再乘以稀释倍数（5 倍）。

五、应用场景

1. 细胞凋亡机制研究

• 定量分析不同处理条件下 IAP 表达变化，揭示凋亡调控网络。

2. 肿瘤生物学研究

• 评估 IAP 在肿瘤细胞中的表达水平，探索其作为治疗靶点的潜力。

3. 药物研发

• 检测药物对 IAP 表达的调控作用，辅助抗凋亡药物的筛选与优化。

4. 疾病诊断

• 分析 IAP 在血清或组织中的异常表达，辅助相关疾病的早期诊断。

六、注意事项

1. 样本质量

• 避免使用溶血、脂血或高浓度 NaN₃ 的样本，以免干扰检测结果。

2. 操作规范

• 加样时间控制在 5 分钟内，避免因孵育时间差异导致误差。

• 显色反应需在 加终止液后 15 分钟内 完成测定。

3. 试剂保存

• 未开封试剂盒需置于 2-8℃ 保存，开封后未用完的板条需密封保存。

• 浓缩洗涤液在低温下可能结晶，使用前需 水浴加温助溶。