Bio-Rad 1704467 Mini-Sub-Cell GT 水平电泳槽

Bio-Rad 1704467 Mini-Sub-Cell GT 水平电泳槽用户指南：科研级核酸与蛋白质分离技术方案

一、产品核心特性与工作原理

1. 技术参数与核心设计

• 凝胶兼容性：支持7×7 cm与7×10 cm双尺寸凝胶盘，通过更换托盘实现快速切换，满足高通量（15孔梳）与高分辨率（8孔梳）实验需求；

• 电压与电流范围：工作电压10-300 V，电流0.01-1.0 A，支持150 V快速分离（如λDNA EcoRI/HindIII酶切产物，1.5小时完成）与60 V精细分离（如RNA完整性检测）；

• 散热与温控：底部蜂窝状散热结构结合高导热材料，长时间电泳（如SDS-PAGE）时温度波动＜1℃，避免样品降解；

• 安全设计：双层绝缘外壳、漏电保护开关及防触电警示标识，符合UL/CE安全标准。

2. 模块化组件与扩展性

• 电极系统：QuickSnap™一键拆卸电极，兼容Bio-Rad PowerPac Basic/HC电源，支持电压斜坡启动（0-300 V/分钟）；

• 梳子配置：标配8孔（1.5 mm厚）与15孔（1.0 mm厚）梳子，可选配可调高度梳子（货号170-4332），适配不同样品量（0.5-50 μL）；

• 反向兼容性：可复用旧型号配件（如凝胶盘、电极），降低实验成本。

二、典型应用场景与实验方案

1. 核酸分子分离与分析

• DNA片段分离：

• 实验设计：使用7×10 cm凝胶盘，15孔梳子加载1 μg λDNA EcoRI/HindIII酶切产物，1×TAE缓冲液，150 V电泳60分钟；

• 结果示例：清晰分离19.3 kb、7.7 kb、6.6 kb等标准片段，条带迁移距离与预期一致，背景信号＜5%（SYBR Safe染色）；

• 数据验证：与Agilent 2100生物分析仪检测结果对比，

• RNA完整性检测：

• 实验设计：7×7 cm凝胶盘，8孔梳子加载1 μg总RNA，1×MOPS缓冲液，60 V电泳90分钟；

• 结果判定：28S/18S rRNA条带亮度比≥1.8，无降解拖尾，背景荧光值＜100 MFI（UV透照）；

• 应用案例：在mRNA疫苗研发中，通过该电泳槽验证体外转录RNA的完整性，确保后续转染效率＞90%。

2. 蛋白质电泳与Western Blot前处理

• SDS-PAGE：

• 实验设计：7×10 cm凝胶盘，15孔梳子加载20 μg细胞裂解液，1×Tris-Glycine缓冲液，120 V电泳75分钟；

• 结果示例：成功分离分子量范围10-250 kDa的蛋白条带，Marker条带清晰（Precision Plus Protein™ Dual Color），背景值＜8%（考马斯亮蓝染色）；

• 转膜效率：搭配Bio-Rad Trans-Blot® Turbo™转印系统，转膜效率＞95%（丽春红S预染验证）。

• Native-PAGE：

• 实验设计：7×7 cm凝胶盘，8孔梳子加载50 μg线粒体蛋白，1×NativePAGE™缓冲液，80 V电泳120分钟；

• 结果示例：分离复合体I（980 kDa）与复合体IV（200 kDa），条带分辨率达0.5 kDa，背景信号＜3%（银染）。

3. 临床诊断与病原体检测

• 病毒核酸分离：

• 实验设计：7×10 cm凝胶盘，15孔梳子加载PCR扩增产物（SARS-CoV-2 N基因片段），1×TBE缓冲液，100 V电泳45分钟；

• 结果判定：特异性条带（127 bp）清晰，与阴性对照（健康人咽拭子）无交叉反应，灵敏度达10拷贝/反应；

• 应用价值：在新冠疫情期间，该电泳槽用于验证qPCR产物特异性，假阳性率＜0.1%。

• 细菌基因突变检测：

• 实验设计：7×7 cm凝胶盘，8孔梳子加载耐药基因扩增产物（如blaKPC），1×TAE缓冲液，80 V电泳60分钟；

• 结果示例：区分野生型（498 bp）与突变型（462 bp）条带，分辨率达1 bp，与测序结果符合率100%。

三、操作规范与注意事项

1. 实验前准备

• 凝胶制备：

• 推荐使用Bio-Rad ReadyAgarose™预制胶（货号161-3107），避免灌胶气泡；

• 若手动灌胶，需使用水平仪确保凝胶盘平整，

• 缓冲液配制：

• 1×TAE：40 mM Tris-Acetate，1 mM EDTA（pH 8.3），室温保存；

• 1×MOPS：20 mM MOPS，5 mM NaOAc，1 mM EDTA（pH 7.0），现用现配。

2. 电泳操作流程

• 样品加载：

• 使用2-20 μL移液器，避免气泡；

• 推荐使用Bio-Rad Loading Dye（货号161-0434），含甘油与追踪染料（溴酚蓝/二甲苯青）。

• 电泳参数：

• DNA分离：150 V，60分钟（7×10 cm凝胶）；

• RNA分离：60 V，90分钟（7×7 cm凝胶）；

• 蛋白质分离：120 V，75分钟（7×10 cm凝胶）。

3. 实验后维护

• 清洁与消毒：

• 使用去离子水冲洗凝胶托盘，避免使用有机溶剂；

• 70%乙醇擦拭电极与外壳，紫外照射30分钟灭菌。

• 储存条件：

• 凝胶盘与梳子4℃保存，电极室温干燥保存；

• 长期停用时，拆除电极并覆盖防尘罩。

四、常见问题解答

Q1：如何解决电泳条带拖尾？
A：

1. 检查上样量是否超载（DNA≤500 ng/孔，RNA≤1 μg/孔）；

2. 确认缓冲液未重复使用超过3次；

3. 降低电压至100 V以下，延长电泳时间。

Q2：凝胶托盘漏液如何处理？
A：

1. 检查密封条是否老化或破损，更换密封条（货号170-4406）；

2. 确保凝胶托盘与底座对齐，避免侧向压力；

3. 缓冲液液面高度不超过凝胶盘边缘3 mm。

Q3：如何延长电极使用寿命？
A：

1. 定期使用细砂纸打磨电极表面氧化物；

2. 避免在缓冲液中添加高浓度SDS（≤0.1%）或尿素（≤8 M）；

3. 电泳结束后立即拆卸电极，用去离子水冲洗。