分享一些成功运用NEB R3142S--NEB/KpnI-HF试剂盒进行科研项目的案例

构建植物表达载体1：在 “一种植物叶片高表达双向启动子及其应用" 的研究中，科研人员取 10μg 人工直接合成的 promoter at1g52220/30 片段与 1μg 的 pcambia1300 - egfp - mcherry 空载体质粒，分别用 BamHI（NEB，#R3136S）及 KpnI（NEB，#R3142S）双酶切，37℃酶切 3 小时。割胶回收酶切反应产物，用 T4 DNA 连接酶连接，连接产物转化大肠杆菌 DH5α 感受态细胞，最终获得了 pcambia1300 - egfp - mcherry - promoter at1g52220/30 载体，用于后续在烟草叶片中的瞬时表达实验，验证了双向启动子的有效性。

构建融合蛋白表达载体3：在 “一种 DNA 环化分子及其用途的制作方法" 的研究中，以 LDB1 的 cDNA 作为 PCR 模板，设计带有 KpnI - HF 酶切位点的引物，扩增 LDB1 的 dimmer domain（DD）片段。扩增产物经纯化后，与 pST1374 - N - NLS - Flag - Linker - dCas9 载体用 NotI - HF（NEB，R3189S）和 KpnI - HF（NEB，R3142S）做酶切，37℃孵育 2h。酶切产物经割胶回收后，通过 T4 连接酶连接，转化涂板，经 Sanger 测序得到正确的 DD - dCas9 质粒，用于后续研究融合蛋白 LDB1 - dCas9 对基因表达的调控作用。