上样缓冲液是一个较为宽泛的概念,用于在电泳实验中辅助样品上样;而 SDS - PAGE 变性蛋白上样缓冲液是针对 SDS - PAGE 电泳中蛋白质样品设计的专用上样缓冲液,二者在组成、作用和适用范围上存在明显区别:
组成成分
上样缓冲液:一般包含甘油或蔗糖等密度调节剂,用于增加样品密度,使样品能沉入加样孔,防止样品在电泳缓冲液中扩散;还含有溴酚蓝、二甲苯青 FF 等指示剂,便于观察电泳进程。但不同类型的电泳,其基础上样缓冲液成分可能有所差异,一些简单的核酸电泳上样缓冲液可能仅由甘油和指示剂组成 。
SDS - PAGE 变性蛋白上样缓冲液:除了含有甘油和溴酚蓝,还包含 SDS 和 β - 巯基乙醇(或二硫苏糖醇 DTT)等特殊成分。SDS 是阴离子去污剂,能使蛋白质变性并带上大量负电荷;β - 巯基乙醇或 DTT 作为强还原剂,可切断蛋白质中的二硫键,让蛋白质充分伸展为线性分子,此外还含有 Tris - HCl 缓冲体系维持 pH 稳定。
作用机制
上样缓冲液:主要作用是辅助样品在电泳加样时能准确进入加样孔,并通过指示剂迁移大致判断电泳进度,对样品本身的结构和性质通常没有明显改变(如在核酸电泳中,不会使核酸变性)。
SDS - PAGE 变性蛋白上样缓冲液:不仅具备上样缓冲液的基本功能,更重要的是使蛋白质变性。通过 SDS 与蛋白质结合、β - 巯基乙醇或 DTT 破坏二硫键,消除蛋白质的电荷和空间结构差异,使蛋白质仅依据分子量大小在电泳中分离,为后续分析蛋白质分子量、纯度等提供基础。
适用范围