UFC5010BK Merck Millipore 超滤管 0.5ml 10KD 用户指南

UFC5010BK Merck Millipore 超滤管 0.5ml 10KD 用户指南

——高效生物分子浓缩与纯化的实验室利器

一、产品概述

UFC5010BK 是默克密理博（Merck Millipore）旗下 Amicon® Ultra 系列超滤离心管，专为生物分子（如蛋白质、核酸、抗体等）的浓缩、脱盐及缓冲液置换设计。该产品采用 10,000 Dalton 分子量截留（MWCO） 的再生纤维素膜（Ultracel®-10），结合垂直滤膜与反向旋转回收技术，可实现 90%以上样品回收率 和 25–30倍浓缩系数，适用于 HPLC 前处理、蛋白纯化及临床样本分析等场景。

二、技术规格

• 膜材质：Ultracel®再生纤维素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 样品容量：0.5 mL（最大起始体积）

• 浓缩后体积：15–20 μL（典型值）

• 离心条件：

• 浓缩：14,000 × g（最大），推荐 7,500–10,000 × g

• 回收：1,000 × g（反向旋转）

• 化学兼容性：pH 1–9，兼容 SDS、Tris-HCl、尿素等缓冲体系

• 无菌性：非无菌，一次性使用

• 存储条件：15–30°C，保质期 3 年

三、核心优势

1. 高效浓缩

• 垂直滤膜设计减少浓差极化，避免滤膜堵塞，处理时间仅需 10–30分钟。

• 示例：0.25 mg/mL 细胞色素 c（12.4 kDa）浓缩后回收率 >95%。

2. 高回收率

• 低吸附滤膜与聚丙烯外壳结合，实现 >90% 样品回收率（稀释起始溶液）。

• 反向旋转功能确保浓缩物回收，避免吸量误差。

3. 灵活应用

• 支持蛋白、核酸、抗体等生物分子的浓缩与纯化。

• 可用于去除引物、连接子或标记反应中的高分子杂质。

四、操作流程

（一）预处理

1. 润洗：

• 新管使用前，加入超纯水至膜上方，冰浴或 4°C 预冷 5 分钟，倒出液体。

• 重复 1 次，确保膜润湿。

2. 平衡：

• 将超滤管插入 1.5 mL 离心管中，使用相同型号空管进行离心平衡。

（二）加样

1. 样品量：

• 加入体积不超过管顶白线（通常 ≤500 μL）。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA 溶液。

2. 离心：

• 4°C 预冷离心机，设置转速 ≤10,000 × g，离心 15–30 分钟。

• 示例参数：7,500 × g、25 分钟（10,000 MWCO 膜浓缩 0.25 mg/mL 细胞色素 c）。

（三）浓缩与回收

1. 浓缩判断：

• 当滤液体积接近 1 mL 时，取 50 μL 缓冲液 +10 μL 滤液，通过 Bradford 法或电泳检测蛋白泄漏。

2. 缓冲液置换：

• 浓缩至 1 mL 后，加入等体积新缓冲液（经 0.22 μm 过滤），重复离心 3 次。

3. 终体积调整：

• 根据需求，将样品浓缩至 ≤50 μL（如需更高浓度，可降低转速至说明书推荐值以下）。

4. 反向旋转回收：

• 离心结束后，将超滤管倒置，1,000 × g 离心 1–2 分钟，回收浓缩液。

（四）清洗与保存

1. 清洗：

• 使用后，用超纯水冲洗 3 次，再用 75% 乙醇冲洗 1 次。

• 残留水可通过 1,000 × g 离心 1 分钟去除。

2. 保存：

• 干燥后置于 4°C 或 -20°C 保存，避免膜干燥开裂。

五、应用案例

1. 蛋白质浓缩

• 使用 UFC5010BK 将 1 mL 0.5 mg/mL BSA 浓缩至 100 μL，回收率 92%（7,500 × g、10 分钟）。

2. 核酸脱盐

• 0.5 mL 50 ng/μL DNA 溶液经 3 次缓冲液置换，盐浓度从 150 mM 降至 10 mM 以下。

3. 抗体纯化

• 从组织培养基中浓缩抗体，结合 UFC5010BK 与蛋白 A 亲和柱，实现抗体纯化与脱盐同步进行。

六、质量控制与验证

1. 批次一致性：

• MWCO 验证（电泳法）

• 回收率测试（BSA/DNA 标准品）

• 膜完整性检测（气泡压力法）

• 每批次提供 CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能验证：

• 重复性测试（n=10）：BSA 回收率 CV ≤3%，DNA 浓缩时间 CV ≤5%。

七、注意事项

1. 操作安全：

• 避免膜干燥，润湿后保持湿润状态直至使用结束。

• 离心时确保转子平衡，防止离心机损坏。

2. 样品兼容性：

• 高粘度样品（如甘油）需稀释后使用。

• 强酸/强碱溶液可能腐蚀再生纤维素膜，需预实验验证。

3. 离心条件：

• 离心时间过长可能导致蛋白沉淀，建议分步离心并监测滤液状态。