赛多利斯VN01H02 Sartorius Vivacon 500 超滤离心管用户指南

赛多利斯VN01H02 Sartorius Vivacon 500 超滤离心管用户指南

——高效样品浓缩与缓冲液置换的科研利器

一、产品概述

赛多利斯VN01H02 Sartorius Vivacon 500 超滤离心管（货号：VN01H02）是一款基于离心驱动的超滤设备，专为蛋白质、核酸等生物大分子的浓缩、脱盐及缓冲液置换设计。该产品采用Hydrosart®再生纤维素超滤膜，结合垂直膜与狭长流道设计，可实现高回收率与低膜污染风险，适用于法医鉴定、生物制药及基础研究等领域。

二、技术规格

• 膜材质：Hydrosart®再生纤维素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 容量范围：0.1–0.5 mL

• 操作温度：4–40℃

• 离心兼容性：适配2.2 mL锥形底角转头或水平转头

• 离心条件：

• 推荐转速：≤7,500 × g（根据样品类型调整）

• 最大耐受转速：14,000 × g（短时）

• 回收率：≥90%（基于50 ng/mL DNA或0.25 mg/mL细胞色素c的测试数据）

三、核心优势

1. 高效浓缩

• 垂直膜设计配合狭长流道，避免滤膜阻塞，颗粒含量高的溶液仍可实现快速超滤。

• 示例：0.5 mL 50 ng/mL DNA溶液浓缩至20 μL，耗时仅25分钟（7,500 × g）。

2. 低膜污染

• Hydrosart®膜对化学物质耐受性强，兼容SDS、Tris-HCl等缓冲体系。

• 流道设计减少浓差极化，延长膜使用寿命。

3. 灵活应用

• 支持DNA、蛋白质、肽等样品的浓缩与脱盐。

• 可选PCR级型号（如VN01H02-PCR），经ETO灭菌处理，消除痕量DNA污染。

四、操作流程

（一）预处理

1. 润洗：

• 新管使用前，加入超纯水至膜上方，冰浴或4℃预冷5分钟，倒出液体。

• 重复1次，确保膜润湿。

2. 平衡：

• 将超滤管插入2.2 mL离心管中，使用相同型号空管进行离心平衡。

（二）加样

1. 样品量：

• 加入体积不超过管顶白线（通常≤500 μL）。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA溶液。

2. 离心：

• 4℃预冷离心机，设置转速≤7,500 × g，离心15–30分钟。

• 示例参数：7,500 × g、25分钟（10,000 MWCO膜浓缩0.25 mg/mL细胞色素c）。

（三）浓缩与回收

1. 浓缩判断：

• 当滤液体积接近1 mL时，取50 μL缓冲液+10 μL滤液，通过Bradford法或电泳检测蛋白泄漏。

2. 缓冲液置换：

• 浓缩至1 mL后，加入等体积新缓冲液（经0.22 μm过滤），重复离心3次。

3. 终体积调整：

• 根据需求，将样品浓缩至≤500 μL（如需更高浓度，可降低转速至说明书推荐值以下）。

（四）清洗与保存

1. 清洗：

• 使用后，用超纯水冲洗3次，再用75%乙醇冲洗1次。

• 残留水可通过1,000 × g离心1分钟去除。

2. 保存：

• 干燥后置于4℃或-20℃保存，避免膜干燥开裂。

五、应用案例

1. 蛋白质浓缩

• 使用VN01H02将1 mL 0.5 mg/mL BSA浓缩至100 μL，回收率92%（7,500 × g、10分钟）。

2. DNA脱盐

• 0.5 mL 50 ng/mL DNA溶液经3次缓冲液置换，盐浓度从150 mM降至10 mM以下。

3. 法医样本处理

• 从血液样本中分离DNA，结合VN01H02-PCR型号，消除设备痕量DNA污染，确保PCR扩增特异性。

六、质量控制与验证

1. 批次一致性：

• MWCO验证（电泳法）

• 回收率测试（BSA/DNA标准品）

• 膜完整性检测（气泡压力法）

• 每批次提供CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能验证：

• 重复性测试（n=10）：BSA回收率CV≤3%，DNA浓缩时间CV≤5%。

七、注意事项

1. 操作安全：

• 避免膜干燥，润湿后保持湿润状态直至使用结束。

• 离心时确保转子平衡，防止离心机损坏。

2. 样品兼容性：

• 高粘度样品（如甘油）需稀释后使用。

• 强酸/强碱溶液可能腐蚀Hydrosart®膜，需预实验验证。

3. 离心条件：

• 离心时间过长可能导致蛋白沉淀，建议分步离心并监测滤液状态。