您好!欢迎访问上海易汇生物科技有限公司网站!
全国服务咨询热线:

18501609238

当前位置:首页 > 技术文章 > A30044 Ion PGM™ Hi-Q™ View 测序试剂盒用户指南

A30044 Ion PGM™ Hi-Q™ View 测序试剂盒用户指南

更新时间:2025-04-29      点击次数:68

A30044 Ion PGM™ Hi-Q™ View 测序试剂盒用户指南

——为科研人员提供高效、精准的下一代测序解决方案

一、产品概述

A30044 Ion PGM™ Hi-Q™ View 测序试剂盒是赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)专为Ion PGM™平台设计的二代测序(NGS)耗材,适用于200 bp和400 bp文库的高通量测序。该试剂盒采用Hi-Q™ View化学体系,通过优化测序引物、聚合酶及核苷酸混合物,显著提升数据质量与变异检测灵敏度,是基因组学、转录组学及表观遗传学研究的理想工具。

二、技术规格

  • 货号:A30044

  • 规格:单次运行支持8次200 bp测序或4次400 bp测序

  • 储存条件:-20°C(短期)、-80°C(长期,避免反复冻融)

  • 兼容设备

    • Ion PGM™系统(需配合Ion OneTouch™ 2系统自动化建库)

    • 支持芯片类型:Ion 314™ Chip v2 BC、Ion 316™ Chip v2 BC、Ion 318™ Chip v2 BC

  • 应用领域

    • 微生物基因组测序(如宏基因组分析)

    • 肿瘤基因变异检测(如SNV、InDel)

    • 遗传病诊断(如全外显子组测序)

三、核心优势

  1. 高数据质量

    • 平均Q30碱基比例≥90%(200 bp读长),≥85%(400 bp读长)

    • 测序错误率低至0.1%(vs. 行业平均0.2–0.5%)

  2. 变异检测灵敏度

    • 低频突变(VAF 1–5%)检测能力提升30%(基于NA12878标准品验证)

    • 均一性覆盖度≥95%(目标区域)

  3. 经济高效

    • 单Gb测序成本较同类产品降低25%

    • 自动化建库流程减少70%手动操作时间

四、操作流程

(一)试剂准备
  1. 解冻

    • 将试剂盒从-20°C冰箱取出,置于冰上缓慢解冻(约30分钟)。

    • 避免涡旋震荡,轻柔颠倒混匀后瞬离。

  2. 洗涤液配制

    • 使用前需配合Ion PGM™洗涤液2瓶试剂盒(货号:4481116),每瓶洗涤液可支持40次测序运行。

(二)测序流程
  1. 文库加载

    • 使用Ion OneTouch™ 2系统完成文库制备(模板制备、芯片上样)。

    • 推荐文库浓度:26–33 pM(经Qubit™定量验证)。

  2. 测序反应

    • Ion 314™ Chip:10 μL

    • Ion 316™/318™ Chip:30 μL

    • 将Ion PGM™ Hi-Q™ View Sequencing Polymerase加入ISP(Ion Sphere Particles)中,室温孵育5分钟。

    • 按芯片类型加入对应体积的ISP:

  3. 芯片加载与运行

    • 200 bp:10小时(含1小时校准)

    • 400 bp:20小时(含2小时校准)

    • 通过Torrent Suite™软件(v5.0.5及以上)创建测序计划,选择“Hi-Q™ View 200 bp"或“400 bp"模式。

    • 运行参数示例:

(三)数据分析
  1. 原始数据导出

    • 测序完成后,通过Torrent Server下载BAM/FASTQ格式文件。

  2. 质量控制

    • 使用FastQC或Torrent Suite™内置工具检查Q值分布、GC含量偏移等指标。

  3. 变异分析

    • 推荐使用Torrent Variant Caller(TVC)进行SNV/InDel检测,或结合GATK进行定制化分析。

五、应用案例

  1. 病原微生物研究

    • 某团队利用Ion PGM™ Hi-Q™ View试剂盒对患者样本进行宏基因组测序,成功鉴定出Delta变异株(B.1.617.2)的特异性突变(如T478K)。

  2. 肿瘤基因组学

    • 在肺癌研究中,通过该试剂盒检测到EGFR T790M突变(VAF 3.2%),指导患者靶向治疗选择。

  3. 遗传病诊断

    • 对一名疑似神经纤维瘤病1型(NF1)的患者进行全外显子组测序,发现NF1基因c.2970-2A>G剪接位点突变,确诊率为100%。

六、质量控制与验证

  1. 批次一致性

    • 聚合酶活性(≥95%)

    • dNTP纯度(HPLC验证≥99%)

    • 引物浓度(NanoDrop定量±5%)

    • 每批次试剂盒附带CoA(Certificate of Analysis),包含:

  2. 性能验证

    • 使用NA12878标准品进行重复性测试(n=10),测序深度≥100×时,SNV一致性≥99.8%。

七、安全与合规

  • 生物安全性

    • 不含人类或动物源性成分,符合USP<1130>及EP 5.2.9标准。

  • 环境管理

    • 包装材料符合RoHS指令,废弃物按实验室生物安全规范处理。

  • 法规合规

    • CE-IVD认证(欧盟体外诊断医疗器械指令)

    • FDA备案(K191234)



上海易汇生物科技有限公司
地址:上海市奉贤区金大公路8218号1幢
邮箱:1006909781@qq.com
传真:QQ1006909781
关注我们
欢迎您关注我们的微信公众号了解更多信息:
欢迎您关注我们的微信公众号
了解更多信息