Gibco 10744019 成分确定的角质形成细胞无血清培养基用户指南

Gibco 10744019 成分确定的角质形成细胞无血清培养基用户指南

一、产品概述

Gibco 10744019 成分确定的角质形成细胞无血清培养基（Defined Keratinocyte-SFM, DKSFM）是一款专为人类角质形成细胞（Keratinocytes）体外培养设计的无血清培养基。该产品通过化学限定配方替代传统含血清培养基，避免批次差异和动物源性成分的潜在风险，广泛应用于皮肤生物学、再生医学、药物筛选及化妆品研发等领域。

二、产品特点

1. 化学限定配方

• 所有成分明确且浓度固定，消除传统血清培养基中批次差异和未知成分的干扰，确保实验结果的可重复性。

• 不含牛垂体提取物（BPE），通过生长促进剂替代其功能，维持细胞形态和生理标志物稳定性。

2. 无血清优势

• 避免血清来源的伦理问题和污染风险（如支原体、病毒、内毒素）。

• 降低实验变量，提升数据准确性，尤其适用于药物筛选和毒性测试。

3. 优化细胞增殖与分化

• 钙浓度低于0.1 mM，支持高密度未分化角质形成细胞的分离和扩增。

• 配方可抑制成纤维细胞增殖，确保角质形成细胞的纯度。

4. 标准化生产

• Gibco严格遵循GMP规范，确保每批次培养基成分和性能一致，满足高可重复性实验需求。

三、技术参数

• 产品编号：10744019

• 规格：500 mL（基础培养基）+ 1 mL（生长添加剂）

• 储存条件：

• 基础培养基：2–8°C避光保存

• 生长添加剂：-5至-20°C避光保存

• 完整培养基（混合后）：2–8°C避光保存，有效期12个月

• 适用细胞类型：人类角质形成细胞、上皮细胞

• 血清水平：无血清

• 添加剂：含谷氨酰胺、酚红

• 灭菌方式：无菌过滤

四、实验应用指南

（一）实验准备

1. 试剂准备

• 从冷藏箱中取出基础培养基，从冷冻箱中取出生长添加剂，室温平衡至融化。

• 在生物安全柜内，将1 mL生长添加剂缓慢加入500 mL基础培养基中，轻轻颠倒混匀，避免产生气泡。

2. 细胞准备

• 使用胰蛋白酶消化角质形成细胞，离心收集细胞沉淀，用新鲜DKSFM重悬细胞。

• 调整细胞密度至推荐范围（如5×10⁴ cells/cm²），接种于培养皿或培养瓶中。

（二）培养条件

1. 温度与CO₂

• 37°C，5% CO₂，饱和湿度环境。

• 建议使用Gibco品牌CO₂培养箱，确保环境稳定性。

2. 换液频率

• 每2–3天更换一次培养基，观察细胞生长状态。

• 当细胞汇合度达到80%–90%时，进行传代。

（三）传代操作

1. 消化与收集

• 弃去旧培养基，用PBS清洗细胞后，加入适量胰蛋白酶消化细胞。

• 显微镜下观察细胞变圆后，加入等体积含血清的培养基终止消化，离心收集细胞。

2. 接种与培养

• 用新鲜DKSFM重悬细胞，按1:3–1:5比例传代至新培养皿中。

• 补充适量培养基，继续培养。

五、质量控制与验证

1. 无菌检测

• 每批次培养基均通过无菌测试，确保无细菌、真菌或支原体污染。

2. 性能验证

• Gibco对DKSFM进行严格的质量控制，包括细胞增殖率、形态维持、标志物表达等指标的验证。

• 用户可通过细胞生长曲线、免疫荧光染色等方法进一步验证培养基性能。

3. 法规合规

• 该产品已提交主文件至FDA，符合生物制品生产质量管理规范（GMP）。

六、注意事项

1. 储存与运输

• 严格按照标签指示储存，避免反复冻融。

• 运输过程中保持冷藏，确保产品稳定性。

2. 操作安全

• 本产品仅供科研使用，不可用于人体或动物治疗。

• 操作时佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤和黏膜。

3. 兼容性

• DKSFM适用于多种角质形成细胞系（如HaCaT、NHEK），但需根据细胞类型优化接种密度和培养条件。

4. 问题处理

• 若发现培养基浑浊、沉淀或细胞生长异常，请立即停止使用，并联系Gibco技术支持。

七、应用案例

1. 皮肤再生研究

• 使用DKSFM培养人类角质形成细胞，构建三维皮肤模型，评估药物对皮肤屏障功能的影响。

2. 药物筛选

• 在DKSFM中培养原代角质形成细胞，测试化妆品成分的毒性和刺激性，确保产品安全性。

3. 肿瘤研究

• 研究角质形成细胞在皮肤癌发生中的作用，利用DKSFM维持细胞未分化状态，模拟肿瘤微环境。